პროტეინაზა K mNGS (თხევადი)
პროტეინაზა K არის სტაბილური სერინის პროტეაზა ფართო სუბსტრატის სპეციფიკურობით.ის ანადგურებს ბევრ ცილას მშობლიურ მდგომარეობაში სარეცხი საშუალებების არსებობის შემთხვევაშიც კი.კრისტალებისა და მოლეკულური სტრუქტურის კვლევების მტკიცებულებები მიუთითებს იმაზე, რომ ფერმენტი მიეკუთვნება სუბტილიზინის ოჯახს აქტიური ადგილის კატალიზური ტრიადით (Asp39-მისი69-სერ224).გაყოფის უპირატესი ადგილია პეპტიდური ბმა, რომელიც გვერდითაა ალიფატური და არომატული ამინომჟავების კარბოქსილის ჯგუფთან დაბლოკილი ალფა ამინო ჯგუფებით.იგი ჩვეულებრივ გამოიყენება მისი ფართო სპეციფიკისთვის.ეს პროტეინაზა K სპეციალურად შექმნილია mNGS-ისთვის.სხვა პროტეინაზა K-სთან შედარებით, ის შეიცავს კიდევ უფრო ნაკლებ ნუკლეინის მჟავას დაბინძურებას იგივე ფერმენტული ეფექტურობით, რაც უკეთესად უზრუნველყოფს mNGS-ის დაქვეითებას.
შენახვის პირობები
2-8℃ 2 წლის განმავლობაში
სპეციფიკაცია
| გარეგნობა | უფერო სითხე ღია ყავისფერიდან |
| აქტივობა | ≥800 ე/მლ |
| ცილის კონცენტრაცია | ≥20 მგ/მლ |
| ნიკასე | არცერთი არ არის აღმოჩენილი |
| DNase | არცერთი არ არის აღმოჩენილი |
| RNase | არცერთი არ არის აღმოჩენილი |
Თვისებები
| EC ნომერი | 3.4.21.64(რეკომბინანტი Tritirachium ალბომიდან) |
| იზოელექტრული წერტილი | 7.81 |
| ოპტიმალური pH | 7.0- 12.0 ნახ. 1 |
| ოპტიმალური ტემპერატურა | 65 ℃ სურ. 2 |
| pH სტაბილურობა | pH 4,5- 12,5 (25 ℃, 16 სთ) სურ. 3 |
| თერმული სტაბილურობა | 50 ℃ ქვემოთ (pH 8.0, 30 წთ) ნახ. 4 |
| შენახვის სტაბილურობა | 90%-ზე მეტი აქტივობა 12 თვის განმავლობაში 25℃ |
| აქტივატორები | SDS, შარდოვანა |
| ინჰიბიტორები | დიიზოპროპილ ფტორფოსფატი;ფენილმეთილსულფონილ ფტორიდი |
აპლიკაციები
1. გენეტიკური დიაგნოსტიკური ნაკრები
2. რნმ და დნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრები
3. არაცილოვანი კომპონენტების ექსტრაქცია ქსოვილებიდან, ცილის მინარევების დეგრადაცია, როგორიცაა დნმვაქცინები და ჰეპარინის მომზადება
4. ქრომოსომის დნმ-ის მომზადება იმპულსური ელექტროფორეზით
5. ვესტერნ ბლოტი
6. ფერმენტული გლიკოზირებული ალბუმინის რეაგენტები in vitro დიაგნოსტიკა
Სიფრთხილის ზომები
ატარეთ დამცავი ხელთათმანები და სათვალეები გამოყენებისას ან აწონვისას და შეინახეთ კარგად ვენტილირებადი გამოყენების შემდეგ.ამ პროდუქტმა შეიძლება გამოიწვიოს კანის ალერგიული რეაქცია და თვალის სერიოზული გაღიზიანება.ინჰალაციის შემთხვევაში შეიძლება გამოიწვიოს ალერგია ან ასთმის სიმპტომები ან ქოშინი.შეიძლება გამოიწვიოს სუნთქვის გაღიზიანება.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული (U) განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა კაზეინის ჰიდროლიზებისთვის 1 μmol-ის წარმოებისთვის.ტიროზინი წუთში შემდეგ პირობებში.
რეაგენტების მომზადება
რეაგენტი I: 1გრ რძის კაზეინი იხსნება 50მლ 0.1M ნატრიუმის ფოსფატის ხსნარში (pH 8.0), ინკუბირებულია 65-70 ℃ წყალში 15 წუთის განმავლობაში, აურიეთ და იხსნება, გაცივდა წყლით, დარეგულირდა ნატრიუმის ჰიდროქსიდით pH 8.0-მდე და ფიქსირდება მოცულობა. 100 მლ.
რეაგენტი II: 0,1 მ ტრიქლოროძმარმჟავა, 0,2 მ ნატრიუმის აცეტატი, 0,3 მ ძმარმჟავა.
რეაგენტი III: 0.4M Na2CO3გამოსავალი.
რეაგენტი IV: ფორინტის რეაგენტი განზავებულია სუფთა წყლით 5-ჯერ.
რეაგენტი V: ფერმენტის გამხსნელი: 0,1 მ ნატრიუმის ფოსფატის ხსნარი (pH 8,0).
რეაგენტი VI: ტიროზინის ხსნარი: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 მკმოლ/მლ ტიროზინი გახსნილი 0,2-ითM HCl.
Პროცედურა
1. 0,5 მლ I რეაგენტი წინასწარ თბება 37℃-მდე, დაამატეთ 0,5 მლ ფერმენტის ხსნარი, კარგად აურიეთ და ინკუბაცია37℃ 10 წუთის განმავლობაში.
2. რეაქციის შესაჩერებლად დაამატეთ 1 მლ რეაგენტი II, კარგად აურიეთ და გააგრძელეთ ინკუბაცია 30 წუთის განმავლობაში.
3. ცენტრიფუგა რეაქციის ხსნარი.
4. აიღეთ 0,5 მლ ზენატანი, დაამატეთ 2,5 მლ რეაგენტი III, 0,5 მლ რეაგენტი IV, კარგად აურიეთ და ინკუბაცია 37℃30 წუთის განმავლობაში.
5. OD660განისაზღვრა როგორც OD1;ცარიელი საკონტროლო ჯგუფი: 0.5მლ რეაგენტი V გამოიყენება ფერმენტის ჩასანაცვლებლადგამოსავალი OD-ის დასადგენად660როგორც OD2, ΔOD=OD1-ოდ2.
6. L-ტიროზინის სტანდარტული მრუდი: 0,5 მლ სხვადასხვა კონცენტრაციის L- ტიროზინის ხსნარი, 2,5 მლ რეაგენტი III, 0,5 მლ რეაგენტი IV 5 მლ ცენტრიფუგის მილში, ინკუბაცია 37℃-ში 30 წუთის განმავლობაში, გამოვლენა OD660L-ტიროზინის სხვადასხვა კონცენტრაციისთვის, შემდეგ მიღებულია სტანდარტული მრუდი Y=kX+b, სადაც Y არის L-ტიროზინის კონცენტრაცია, X არის OD600.
Გაანგარიშება
2: რეაქციის ხსნარის მთლიანი მოცულობა (მლ)
0.5: ფერმენტის ხსნარის მოცულობა (მლ)
0.5: რეაქციის სითხის მოცულობა, რომელიც გამოიყენება ქრომოგენურ განსაზღვრაში (მლ)
10: რეაქციის დრო (წთ)
Df: განზავება მრავალჯერადი
C: ფერმენტის კონცენტრაცია (მგ/მლ)
ცნობები
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.ბიოფისი.რეზ.კომუნ.(1971);44:513.
3. ჰილცი, ჰ.და სხვ.Ევრო.ჯ.ბიოქიმი.(1975);56:103–108.
4. სამბრუკ ჯet ალ., მოლეკულური კლონირება: ლაბორატორიული სახელმძღვანელო, მე-2 გამოცემა, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
ფიგურები
ნახ.1 ოპტიმალური pH
100მმ ბუფერული ხსნარი:pH6.0-8.0, Na-ფოსფატი;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, გლიცინი-NaOH.ფერმენტის კონცენტრაცია:1მგ/მლ
ნახ.2 ოპტიმალური ტემპერატურა
რეაქცია 20 მმ K-ფოსფატის ბუფერში pH 8.0.ფერმენტის კონცენტრაცია: 1 მგ/მლ
ნახ.3 pH სტაბილურობა
25 ℃, 16 სთ-დამუშავება 50 მმ ბუფერული ხსნარით: pH 4.5-5.5, აცეტატი;pH 6,0-8,0, Na-ფოსფატი;pH 8.0-9.0, ტრის-HCl.pH 9.0- 12.5, გლიცინი-NaOH.ფერმენტის კონცენტრაცია: 1 მგ/მლ
ნახ.4 თერმული სტაბილურობა
30 წთ-დამუშავება 50 მმ ტრის-HCl ბუფერით, pH 8.0.ფერმენტის კონცენტრაცია: 1 მგ/მლ
ნახ.5 შენახვა სტაბილურიty at 25℃
