5×Neoscript სწრაფი RT-qPCR Premix plus-UNG

კატის ნომერი: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) არის უაღრესად სტაბილური ერთ მილის ზონდზე დაფუძნებული ნარევი, რომელიც შესაფერისია ერთსაფეხურიანი საპირისპირო ტრანსკრიფციისთვის და რაოდენობრივი PCR (qRT-PCR).იგი მხარს უჭერს პრაიმერების და ზონდების წინასწარ შერევას და რჩება სტაბილური დაბალ ტემპერატურაზე ხანგრძლივი შენახვის შემდეგ.შესამოწმებელი ნიმუში შეიძლება დაემატოს უშუალოდ გამოყენებისას, მილის დამატებითი გახსნის/პიპეტის მუშაობის გარეშე.ეს პროდუქტი შეიცავს კომპონენტებს, მაგ., ცხელი დაწყების დნმ პოლიმერაზას, M-MLV, სითბოსადმი მდგრადი ურაცილის დნმ გლიკოზილაზას (TS-UNG), RNase ინჰიბიტორს, MgCl₂, dNTPs (dUTP-ით dTTP-ის ნაცვლად) და სტაბილიზატორებით.გენმოდიფიცირებული სწრაფი ამპლიფიკაციის საპირისპირო ტრანსკრიპტაზასა და დნმ პოლიმერაზას საშუალებით შესაძლებელია PCR გაძლიერების დასრულება 20-40 წუთში.ეს რეაგენტი იყენებს სპეციალურ ბუფერს qPCR-სთვის ანტი-ინჰიბიტორული ამპლიფიკაციის ფერმენტის და UNG ფერმენტის შერეული ფერმენტებით.ამრიგად, მას შეუძლია მიიღოს სამიზნე გენების კარგი გაძლიერება და თავიდან აიცილოს PCR ნარჩენი და აეროზოლური დაბინძურებით გამოწვეული ცრუ გაძლიერება.ეს რეაგენტი თავსებადია უმეტეს ფლუორესცენტულ რაოდენობრივ PCR ინსტრუმენტებთან მწარმოებლებისგან, როგორიცაა Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad და Roche.

Კომპონენტი

1.25×Neoscript სწრაფი RTase/UNG Mix

2.5×Neoscript სწრაფი RT პრემიქსის ბუფერი (dUTP)

შენახვის პირობები

ყველა კომპონენტი უნდა ინახებოდეს -20℃ გრძელვადიანი შენახვისთვის და 4℃ 3 თვემდე.გთხოვთ, გალღობის შემდეგ კარგად აურიოთ და გამოყენებამდე ცენტრიფუგა.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას.

qRT-PCR რეაქციის სისტემის მომზადება

1) ა.პრაიმერის საბოლოო კონცენტრაცია ჩვეულებრივ არის 0.2μM.უკეთესი შედეგისთვის, პრაიმერის კონცენტრაციის ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 0.2-1μM დიაპაზონში.ზოგადად, ზონდის კონცენტრაციის ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 0.1-0.3μM დიაპაზონში.

2) b. სწრაფი PCR პროცედურის გამოყენებისას, პრაიმერებისა და ზონდების კონცენტრაციის გაზრდამ შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი გაძლიერების შედეგები და მათი თანაფარდობა შესაბამისად უნდა იყოს ოპტიმიზირებული.

3) სხვადასხვა ტიპის ნიმუშები შეიცავს ინჰიბიტორისა და სამიზნე გენის ასლის რაოდენობას სხვადასხვა ტიპსა და შინაარსს.ნიმუშის მოცულობა უნდა განიხილებოდეს რეალური მდგომარეობის მიხედვით.საჭიროების შემთხვევაში, გააკეთეთ ნიმუშის განზავება ნუკლეაზასგან თავისუფალი წყლით ან TE ბუფერით.

რეაქცია Cპირობები

Ხარისხის კონტროლი

1.ფუნქციის გამოვლენა: qPCR-ის მგრძნობელობა, სპეციფიკა და განმეორებადობა.

2.არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა: არ არის ეგზოგენური ენდონუკლეაზა და ეგზონუკლეაზა დაბინძურება.

შენიშვნები

1.სწრაფი დნმ პოლიმერაზას გაძლიერების სიჩქარე არანაკლებ 1 კბ/10 წმ.სხვადასხვა PCR ინსტრუმენტს აქვს გათბობის და გაგრილების სხვადასხვა სიჩქარე, ტემპერატურის კონტროლის რეჟიმები და თბოგამტარობა, და, შესაბამისად, თქვენი პრაიმერის/ზონდის კონცენტრაციისა და მუშაობის მეთოდის ოპტიმიზაცია თქვენს კონკრეტულ სწრაფ PCR ინსტრუმენტთან ერთად აუცილებელია.

2.ამ პროდუქტს აქვს ფართო გამოყენებადობა და ის შესაფერისია მაღალი მგრძნობელობის მოლეკულური დიაგნოსტიკისთვის.სამსაფეხურიანი PCR მეთოდი რეკომენდირებულია პრაიმერებისთვის დუღილის დაბალი ტემპერატურის ან 200 bp-ზე მეტი გრძელი ფრაგმენტების ამპლიფიკაციისთვის.

3.ვინაიდან სხვადასხვა ამპლიკონებს აქვთ dUTP-ის გამოყენების განსხვავებული ეფექტურობა და განსხვავებული მგრძნობელობა UNG-ის მიმართ, რეაგენტები უნდა იყოს ოპტიმიზირებული, თუ აღმოჩენის მგრძნობელობა მცირდება UNG სისტემის გამოყენებისას.საჭიროების შემთხვევაში გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ ტექნიკური მხარდაჭერისთვის.

4.გადასატანი PCR პროდუქტების გაძლიერების თავიდან ასაცილებლად, საჭიროა სპეციალური ექსპერიმენტული ზონა და პიპეტი ამპლიფიკაციისთვის.იმუშავეთ ხელთათმანებით და ხშირად შეცვალეთ და არ გახსნათ PCR ტუბი გაძლიერების შემდეგ.