ვირუსული დნმ/რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრები
ეს ნაკრები შესაფერისია მაღალი სისუფთავის ვირუსული დნმ/რნმ-ის სწრაფი ექსტრაქციისთვის ისეთი ნიმუშებიდან, როგორიცაა ნაზოფარინგეალური ნაცხი, გარემოსდაცვითი ნაცხი, უჯრედული კულტურის ზენატანტები და ქსოვილის ჰომოგენატური სუპერნატანტები.ნაკრები დაფუძნებულია სილიციუმის მემბრანის გამწმენდის ტექნოლოგიაზე, რომელიც გამორიცხავს ფენოლის/ქლოროფორმის ორგანული გამხსნელების ან შრომატევადი ალკოჰოლის დალექვის აუცილებლობას მაღალი ხარისხის ვირუსული დნმ/რნმ-ის ამოსაღებად.მიღებული ნუკლეინის მჟავები თავისუფალია მინარევებისაგან და მზად არის გამოსაყენებლად ქვედა დინების ექსპერიმენტებში, როგორიცაა საპირისპირო ტრანსკრიფცია, PCR, RT-PCR, რეალურ დროში PCR, შემდეგი თაობის თანმიმდევრობა (NGS) და Northern blot.
შენახვის პირობები
შეინახეთ 15-25℃ ტემპერატურაზე და გადაიტანეთ ოთახის ტემპერატურაზე
კომპონენტები
| კომპონენტები | 100RXNS |
| ბუფერი VL | 50 მლ |
| ბუფერი RW | 120 მლ |
| RNase თავისუფალი ddH2 O | 6 მლ |
| FastPure RNA სვეტები | 100 |
| საკოლექციო მილები (2მლ) | 100 |
| RNase-ის გარეშე კოლექციური მილები (1 .5მლ) | 100 |
ბუფერი VL:უზრუნველყოს გარემო ლიზისისა და შებოჭვისთვის.
ბუფერი RW:ამოიღეთ ნარჩენი ცილები და სხვა მინარევები.
RNase თავისუფალი ddH2O:გამორეცხეთ დნმ/რნმ მემბრანიდან სპინის სვეტში.
FastPure RNA სვეტები:კონკრეტულად შეიწოვება დნმ/რნმ.
კოლექციის ტუბები 2 მლ:შეაგროვეთ ფილტრი.
RNase-ის გარეშე კოლექციის ტუბები 1.5 მლ:შეაგროვეთ დნმ/რნმ.
აპლიკაციები
ნაზოფარინგეალური ნაცხი, გარემოსდაცვითი ნაცხი, უჯრედული კულტურის ზენატანები და ქსოვილის ჰომოგენატური სუპერნატანტები.
თვითმომზადებული მატერიიალსი
RNase-ის გარეშე პიპეტის წვერები, 1.5 მლ RNase-ის გარეშე ცენტრიფუგის მილები, ცენტრიფუგა, vortex mixer და პიპეტები.
ექსპერიმენტის პროცესი
შეასრულეთ ყველა შემდეგი ნაბიჯი ბიოუსაფრთხოების კაბინეტში.
1. დაამატეთ 200 μl ნიმუში RNase-ისგან თავისუფალ ცენტრიფუგა მილში (შეავსეთ PBS ან 0,9% NaCl არასაკმარისი ნიმუშის შემთხვევაში), დაამატეთ 500 μl Buffer VL, კარგად აურიეთ მორევით 15 – 30 წმ და ცენტრიფუგა. მოკლედ შეაგროვეთ ნარევი მილის ბოლოში.
2. მოათავსეთ FastPure RNA სვეტები კოლექციურ ტუბებში 2 მლ.გადაიტანეთ ნარევი ნაბიჯი 1-დან FastPure RNA სვეტებზე, ცენტრიფუგა 12000 rpm-ზე (13400 × გ) 1 წუთის განმავლობაში და გადააგდეთ ფილტრატი.
3. დაამატეთ 600 μl ბუფერი RW FastPure RNA სვეტებს, ცენტრიფუგა 12,000 rpm (13,400 × გ) 30 წამის განმავლობაში და გადააგდეთ ფილტრატი.
4. გაიმეორეთ ნაბიჯი 3.
5. ცარიელი სვეტის ცენტრიფუგა 12000 ბრ/წთ-ზე (13400 × გ) 2 წუთის განმავლობაში.
6. ფრთხილად გადაიტანეთ FastPure RNA სვეტები ახალ RNase-ის გარეშე კოლექციურ ტუბში 1.5 მლ (მოწოდებულია კომპლექტში) და დაამატეთ 30 – 50 μl RNase-ის გარეშე ddH2O მემბრანის ცენტრში სვეტის შეხების გარეშე.დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 1 წუთის განმავლობაში და ცენტრიფუგა 12000 rpm (13400 × გ) 1 წუთის განმავლობაში.
7. გააუქმეთ FastPure RNA სვეტები.დნმ/რნმ შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ შემდგომი გამოკვლევებისთვის, ან ინახება -30~-15°C-ზე მოკლე პერიოდის განმავლობაში ან -85~-65°C-ზე უფრო ხანგრძლივი პერიოდის განმავლობაში.
შენიშვნები
მხოლოდ კვლევისთვის.არ გამოიყენება სადიაგნოსტიკო პროცედურებში.
1. წინასწარ დააბალანსეთ ნიმუშები ოთახის ტემპერატურამდე.
2. ვირუსები ძალიან ინფექციურია.გთხოვთ, დარწმუნდეთ, რომ ექსპერიმენტის დაწყებამდე დაცულია უსაფრთხოების ყველა აუცილებელი ზომა.
3. მოერიდეთ ნიმუშის განმეორებით გაყინვას და დათბობას, რადგან ამან შეიძლება გამოიწვიოს ექსტრაქტული ვირუსული დნმ/რნმ-ის დეგრადაცია ან დაქვეითება.
4. დამოუკიდებლად მომზადებული მოწყობილობა მოიცავს RNase-ის გარეშე პიპეტების წვერებს, 1.5 მლ RNase-ის გარეშე ცენტრიფუგის მილებს, ცენტრიფუგას, მორევის შემრევს და პიპეტებს.
5. ნაკრების გამოყენებისას ატარეთ ლაბორატორიული ქურთუკი, ერთჯერადი ლატექსის ხელთათმანები და ერთჯერადი ნიღაბი და გამოიყენეთ RNase-ის გარეშე სახარჯო მასალები, რათა მინიმუმამდე დაიყვანოთ RNase დაბინძურების რისკი.
6. შეასრულეთ ყველა ნაბიჯი ოთახის ტემპერატურაზე, თუ სხვა რამ არ არის მითითებული.
მექანიზმი და სამუშაო პროცესი
