Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
კატის ნომერი: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) არის მულტიპლექსური რაოდენობრივი PCR ნაკრები, რომელიც დაფუძნებულია შაბლონად რნმ-ზე.ექსპერიმენტის პროცესში იმავე ტუბში ჩატარდა საპირისპირო ტრანსკრიფცია და რაოდენობრივი PCR, რამაც გაამარტივა ექსპერიმენტული ოპერაცია და შეამცირა დაბინძურების რისკი.ამ კომპლექტში, პირველი ჯაჭვის cDNA იყო ეფექტურად სინთეზირებული სითბოს მდგრადი უკუ ტრანსკრიპტაზას მიერ და რაოდენობრივად გაძლიერდა HotStart Tag დნმ პოლიმერაზას მიერ.ნაკრები ძირითადად შეიცავს ოპტიმიზებულ MP ბუფერს, ფერმენტების მიქსს და ა.შ. ბუფერული ხსნარი უკვე შეიცავს Mg2+და dNTP.გარდა ამისა, ემატება ფაქტორები, რომლებსაც შეუძლიათ ეფექტურად დათრგუნონ არასპეციფიკური PCR გაძლიერება და გააუმჯობესონ მრავალი qPCR რეაქციის ამპლიფიკაციის ეფექტურობა, რამაც შეიძლება უზრუნველყოს გაძლიერების ეფექტურობა და განახორციელოს მრავალჯერადი ამპლიფიკაციის რეაქცია.dUTP/UDG სისტემა დაემატა აეროზოლური დაბინძურების რისკის ეფექტურად თავიდან ასაცილებლად.
კომპონენტები
1. ბუფერი
2. ფერმენტის მიქსი
სპეციფიკაცია
| ცხელი დაწყება | ჩაშენებული ცხელი დაწყება |
| გამოვლენის მეთოდი | პრაიმერი-ზონდის გამოვლენა |
| PCR მეთოდი | ერთი ნაბიჯი RT-qPCR |
| პოლიმერაზა | Taq დნმ პოლიმერაზა |
| ნიმუშის ტიპი | დნმ |
შენახვის პირობები
პროდუქტი იგზავნება მშრალი ყინულით და შეიძლება ინახებოდეს -25~-15℃ ტემპერატურაზე 1 წლის განმავლობაში.თავიდან უნდა იქნას აცილებული ხშირიგაყინვა-დათბობა.რეკომენდებულია ცალკე შენახვა.
ინსტრუქციები
1.რეაქცია სისტემა
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 2 × MP ბუფერი | 12.5 | 1× |
| ფერმენტის მიქსი | 1 | - |
| პრაიმერის/ზონდის ნარევი (2,5 მკმ) | 3 | 0.3μM |
| შაბლონი რნმ | 1-10 | - |
| RNase თავისუფალი H2O | 25-მდე | - |
შენიშვნები:
გამოყენებამდე აუცილებლად კარგად აურიეთ, მოერიდეთ ძლიერი ვიბრაციით გამოწვეულ ზედმეტ ბუშტებს.
ა.პრაიმერის კონცენტრაცია: პრაიმერის ნაზავი მულტიპლექს პრაიმერის ჩათვლით, სიტუაციიდან გამომდინარე, პრაიმერის ოპტიმალური კონცენტრაცია შეიძლება იყოს 0.ლ-დან 1.0μM-მდე.
ბ.ზონდის კონცენტრაცია: ზონდის ნაზავი, მულტიპლექსური ზონდის ეტიკეტირების ფლუორესცენტური ჯგუფის ჩათვლით, სიტუაციიდან გამომდინარე, ზონდის ოპტიმალური კონცენტრაცია შეიძლება იყოს 0.05-დან 0.5μM-მდე.
გ.შაბლონის განზავება: qPCR ძალიან მგრძნობიარეა და რეკომენდებულია შაბლონის განზავება.საკონტროლო Ct მნიშვნელობა შესაფერისია 20-დან 35-მდე.
დ.სისტემის მომზადება: გთხოვთ მოამზადოთ ულტრა სუფთა სამუშაო მაგიდაზე, პიპეტორსა და რეაქციის მილში ნუკლეაზის ნარჩენების გარეშე;რეკომენდირებულია იარაღის თავის გამოყენება ფილტრის ელემენტით.მოერიდეთ ჯვარედინი დაბინძურებას და აეროზოლებით დაბინძურებას.
2. ოპტიმიზებული ველოსიპედიᲝქმი
| ციკლი ნაბიჯი | Ტემპი. | დრო | ციკლები |
| საპირისპირო ტრანსკრიფცია | 50℃ა | 20 წუთი | 1 |
| საწყისი-დენატურაცია | 95℃ | 5 წთ | 1 |
| გამაძლიერებელი რეაქცია | 95℃ | 15 წმ |
40-45 |
| 60℃ b | 30 წმ c |
შენიშვნები:
ა.საპირისპირო ტრანსკრიფცია: ტემპერატურას შეუძლია აირჩიოს 42°C ან 50°C.
ბ.გამაძლიერებელი რეაქცია: ტემპერატურა რეგულირდება შექმნილი პრაიმერების Tm მნიშვნელობის მიხედვით.
გ.ფლუორესცენციის სიგნალის მიღება: გთხოვთ, დააყენოთ ექსპერიმენტული პროცედურა ინსტრუმენტის სახელმძღვანელოს მოთხოვნების შესაბამისად.
შენიშვნები
გთხოვთ, ატაროთ საჭირო PPE, როგორიცაა ლაბორატორიული ქურთუკი და ხელთათმანები, თქვენი ჯანმრთელობისა და უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად.
