2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)

კატის ნომერი: HCB5151A

SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) შექმნილია PCR-ის შესასრულებლად უშუალოდ ნიმუშებიდან დნმ-ის ექსტრაქციის ან ნიმუშის მომზადების გარეშე.ეს რეაგენტი შედგება ცხელი დაწყების დნმ პოლიმერაზასგან, ურაცილის დნმ გლიკოზილაზასგან (UNG), RNase ინჰიბიტორისგან, MgCl.₂, dNTPs (dUTP-ით dTTP-ის ნაცვლად) და სტაბილიზატორები, რაოდენობრივი PCR-ისთვის (qPCR).ეს რეაგენტი აყალიბებს მაღალი ინჰიბიტორების ტოლერანტობას და, ამრიგად, ის შეიძლება პირდაპირ იქნას გამოყენებული ნიმუშების გამოსავლენად, როგორიცაა ყელის ნაცხი, ნერწყვი, ანტიკოაგულირებული მთლიანი სისხლი, პლაზმა და შრატი დნმ-ის ექსტრაქციის გარეშე.რეაგენტი იყენებს საკუთრების ბუფერს qPCR-სთვის ანტი-ინჰიბიტორული დნმ პოლიმერაზასა და UNG ფერმენტის შერეული ფერმენტებით.ამრიგად, მას შეუძლია მიიღოს სამიზნე გენების კარგი გაძლიერება ინჰიბიტორების შემცველ ნიმუშებში და დათრგუნოს ცრუ დადებითი გაძლიერება, რომელიც გამოწვეულია PCR ნარჩენი და აეროზოლური დაბინძურებით.ეს რეაგენტი თავსებადია უმეტეს ფლუორესცენტურ რაოდენობრივ PCR ინსტრუმენტებთან, როგორიცაა Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche და ა.შ.

კომპონენტები

1. 50×SensiDirect ფერმენტი/UNG მიქსი

2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)

შენახვის პირობები

ყველა კომპონენტი უნდა ინახებოდეს -20℃ გრძელვადიანი შენახვისთვის და 4℃ 3 თვემდე.გთხოვთ, გალღობის შემდეგ კარგად აურიოთ და გამოყენებამდე ცენტრიფუგა.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას.

ველოსიპედის პროტოკოლი

პიპეტირების ინსტრუქციები

1. პრაიმერის საბოლოო კონცენტრაცია ჩვეულებრივ არის 0.2μM.უკეთესი შედეგისთვის, პრაიმერის კონცენტრაციის ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 0.2-1μM დიაპაზონში.

2. ზოგადად, ზონდის კონცენტრაციის ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 0.1-0.3μM დიაპაზონში.ზონდის ოპტიმალური კონცენტრაცია დაკავშირებულია რეალურ დროში PCR ამპლიფიკაციის ინსტრუმენტთან, ზონდის ტიპთან და ფლუორესცენტური მარკირების ნივთიერების ტიპთან.გთხოვთ, გაეცნოთ ხელსაწყოს სახელმძღვანელოს ან თითოეული ფლუორესცენტური ზონდის სპეციფიკურ მოთხოვნებს.

3. სხვადასხვა ტიპის ნიმუშები შეიცავს ინჰიბიტორისა და სამიზნე გენის ასლის რაოდენობის სხვადასხვა ტიპს და შემცველობას.ნიმუშის მოცულობა უნდა განიხილებოდეს რეალური მდგომარეობის მიხედვით.გააკეთეთ ნიმუშის განზავება ნუკლეაზასგან თავისუფალი წყლის ან TE ბუფერის დამატებით, საჭიროების შემთხვევაში.

4. სხვადასხვა ნიმუშების რეკომენდებული მოცულობა:

Ხარისხის კონტროლი

1. ფუნქციის გამოვლენა: qPCR-ის მგრძნობელობა, სპეციფიკა და განმეორებადობა.

2. არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა: არ არის ეგზოგენური ენდონუკლეაზა და ეგზონუკლეაზური დაბინძურება.

პროდუქტის შენიშვნები

1. ეს პროდუქტი იყენებს ახალი ტიპის ცხელი დაწყების დნმ პოლიმერაზას, რომელიც შეიძლება გააქტიურდეს 1-5 წუთში. ვინაიდან მისი რეაქციის ბუფერი ოპტიმიზირებულია, ის უფრო შესაფერისია ორმაგი ან მრავალჯერადი ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR-სთვის ზონდის მეთოდით.

2. თუ PCR გაძლიერების Rn მნიშვნელობა ძალიან დაბალია ან გაძლიერება აშკარად შეფერხებულია, ნიმუშის რაოდენობის შემცირებამ, რეაქციის მოცულობის გაზრდამ ან ნიმუშის წინა განზავებამ შეიძლება გააუმჯობესოს შედეგები.

3. სისხლის, ნერწყვის, შარდის, ყელის ნაცხის და ა.შ. შეგროვება უნდა შეესაბამებოდეს კლინიკურ კრიტერიუმებს და ახალი ნიმუშის გამოყენება შეიძლება ნუკლეინის მჟავას დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად.

4. ვინაიდან სხვადასხვა ამპლიკონებს აქვთ განსხვავებული გამოყენების ეფექტურობა dUTP-თან და მგრძნობელობა UNG-ის მიმართ, რეაგენტები უნდა იყოს ოპტიმიზირებული, თუ აღმოჩენის მგრძნობელობა მცირდება UNG სისტემის გამოყენებისას.საჭიროების შემთხვევაში გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ ტექნიკური მხარდაჭერისთვის.

5. გადასატანი PCR პროდუქტების გაძლიერების თავიდან აცილების მიზნით ერთსაფეხურიან რეაქციებს შორის, გაძლიერებისთვის საჭიროა გამოყოფილი ექსპერიმენტული არე და პიპეტი.იმუშავეთ ხელთათმანებით და ხშირად შეცვალეთ და არ გახსნათ რეაქციის მილი PCR გაძლიერების შემდეგ.