სუპერსტარტი qPCR Premix plus-UNG
კატის ნომერი: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG არის სპეციალიზებული რეაგენტი, რომელიც შექმნილია რეალურ დროში PCR ხარისხობრივი და რაოდენობრივი რეაქციებისთვის, ზონდზე დაფუძნებული გამოვლენის გამოყენებით, შემუშავებული სპეციალურად ლიოფილიზაციის პროცესებისთვის.იგი შეიცავს ახალ ცხელი დაწყების ფერმენტს Hotstart Taq plus (DG), რომელსაც აქვს თავისი Taq ფერმენტის აქტივობა დალუქული ოთახის ტემპერატურაზე, ეფექტურად აფერხებს არასპეციფიკურ გაძლიერებას, რომელიც გამოწვეულია პრაიმერის არასპეციფიკური დუღილით ან პრაიმერის დიმერის წარმოქმნით დაბალი ტემპერატურის პირობებში, რითაც უმჯობესდება. გამაძლიერებელი რეაქციის სპეციფიკა.ეს რეაგენტი იყენებს ოპტიმიზებულ qPCR სპეციფიკურ ბუფერს და UNG/dUTP დაბინძურების საწინააღმდეგო სისტემას, რათა მიაღწიოს სწრაფ ცხელ დაწყებას, რაც მნიშვნელოვნად აუმჯობესებს qPCR რეაქციების ეფექტურობასა და მგრძნობელობას.მას შეუძლია მიიღოს კარგი სტანდარტული მრუდები რაოდენობრივი რაოდენობების ფართო დიაპაზონში და ზუსტად შეასრულოს რაოდენობები, ეფექტურად თავიდან აიცილოს ცრუ დადებითი გაძლიერება, რომელიც გამოწვეულია ნარჩენი PCR პროდუქტებით ან აეროზოლური დაბინძურებით.ეს რეაგენტი თავსებადია უმეტეს ფლუორესცენტურ რაოდენობრივ PCR ინსტრუმენტებთან მწარმოებლებისგან, როგორიცაა Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad და Roche და ა.შ., და ავლენს კარგ სტაბილურობას ლიოფილიზებულ ფორმაში.
რეაგენტის შემადგენლობა
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (მგ2+უფასო) (DG)
2. 250 მმ MgCl2
3. 4×ლიოპროტექტორი (სურვილისამებრ)
შენახვის პირობები
გრძელვადიანი შენახვა -20℃;შეიძლება ინახებოდეს 4℃ ტემპერატურაზე 3 თვემდე.გამოყენებამდე კარგად აურიეთ დათავიდან აიცილოთ განმეორებითი გაყინვა და დათბობა.
ველოსიპედის პროტოკოლი
| Პროცედურა | Ტემპი. | დრო | ციკლი |
| საჭმლის მონელება | 50℃ | 2 წთ | 1 |
| პოლიმერაზას გააქტიურება | 95℃ | 1-5 წთ | 1 |
| დენატურა | 95℃ | 10-20 წმ | 40-50 |
| Annealing და Extension | 56 ~ 64 ℃ | 20-60 წმ | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syღეროს მომზადება
|
კომპოზიცია |
25 μL მოცულობა |
50µL მოცულობა |
საბოლოო კონცენტრაცია |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(მგ2+უფასო) (DG) | 5 მკლ | 10 μL | 1× |
| 250 მმ MgCl2 | 0.45 მკლ | 0,9 მკლ | 4,5 მმ |
| 4 × ლიოპროტექტორი1 | 6.25 მკლ | 12,5 მკლ | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1μL | 2μL | 1× |
| შაბლონი დნმ3 | --- | --- | --- |
| ddH2O | 25 μL-მდე | 50 μL-მდე | --- |
1. პრაიმერებისთვის 0.2μM საბოლოო კონცენტრაცია ჩვეულებრივ კარგ შედეგს იძლევა;როდესაც რეაქცია ცუდია, საჭიროების შემთხვევაში დაარეგულირეთ პრაიმერის კონცენტრაცია 0.2-1μM დიაპაზონში.ზონდის კონცენტრაცია, როგორც წესი, ოპტიმიზებულია 0.1-0.3μM დიაპაზონში გრადიენტური ექსპერიმენტების მეშვეობით ოპტიმალური კომბინაციების მოსაძებნად.
2. სხვადასხვა ტიპის შაბლონებში შემავალი სამიზნე გენების ასლის რაოდენობა მერყეობს;საჭიროების შემთხვევაში, შეიძლება განხორციელდეს გრადიენტური განზავება შაბლონის დამატების ოპტიმალური რაოდენობის დასადგენად.
3. ამ სისტემის ლიოფილიზება შესაძლებელია;როდესაც მომხმარებლები იყენებენ ამ სისტემას გაყინვა-გაშრობის მოთხოვნების გარეშე, შეიძლება შერჩევით დაემატოს 4 × ლიოპროტექტორი; თუ საჭიროა ყინვაში გამხმარი პროდუქტები, თხევადი რეაგენტების პროდუქტის მუშაობის ვალიდაციის ეტაპზე, მას უნდა დაემატოს 4 × ლიოპროტექტორი ლიოფილიზებული სისტემის კომპონენტებთან შესაბამისობის უზრუნველსაყოფად. და ეფექტები.
როდესაც სისტემა გამოიყენებად ყინვაში გასაშრობად მოამზადეთ სისტემა as შემდეგი:
| კომპოზიცია | 25μL რეაქციის სისტემა |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (მგ2+უფასო) (DG) | 5 მკლ |
| 250 მმ MgCl2 | 0.45 მკლ |
| 4 × ლიოპროტექტორი | 6.25 მკლ |
| 25×Primer-Probe Mix | 1μL |
| ddH2O | 18-20 μL-მდე |
* თუ საჭიროა ყინვაში გაშრობის სხვა სისტემები, გთხოვთ, ცალკე მიმართოთ.
ლიოფილიზაციის პროცესიss
| Პროცედურა | Ტემპი. | დრო | მდგომარეობა | წნევა |
| წინასწარ გაყინვა | 4℃ | 30 წთ | გამართავს |
1 ატმ |
| -50℃ | 60 წთ | გაგრილება | ||
| -50℃ | 180 წთ | გამართავს | ||
| პირველადი გაშრობა | -30℃ | 60 წთ | გათბობა |
საბოლოო ვაკუუმი |
| -30℃ | 70 წთ | გამართავს | ||
| მეორადი გაშრობა | 25℃ | 60 წთ | გათბობა |
საბოლოო ვაკუუმი |
| 25℃ | 300 წთ | გამართავს |
2. ზემოაღნიშნული ლიოფილიზაციის პროცესი მხოლოდ ცნობისთვისაა.პროდუქტის სხვადასხვა ტიპს და სხვადასხვა საყინულე-საშრობს სხვადასხვა პარამეტრს აქვს, ამიტომ კორექტირება შეიძლება მოხდეს რეალურადპირობები გამოყენების დროს.
3. სხვადასხვა ლიოფილიზაციის პროცესი შეიძლება იყოს შესაფერისი ლიოფილიზებულის სხვადასხვა ზომის პარტიებისთვისპროდუქტები, ამიტომ საკმარისი ტესტირების ვალიდაცია უნდა ჩატარდეს ფართომასშტაბიანი წარმოებისთვის გამოყენებისას.
ლიოფილიზის გამოყენების ინსტრუქციად ფხვნილი
1. მოკლედ ცენტრიფუგა ლიოფილიზებული ფხვნილი;
2. დაამატეთ ნუკლეინის მჟავის შაბლონი ლიოფილიზებულ ფხვნილს და დაამატეთ წყალი 25µL-მდე;
3. კარგად აურიეთ ცენტრიფუგირებით და გაუშვით მანქანაზე.
Ხარისხის კონტროლი:
1. ფუნქციური ტესტირება: qPCR-ის მგრძნობელობა, სპეციფიკა, განმეორებადობა.
2. არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა, არ არის ეგზოგენური ენდო/ეგზონუკლეაზა დაბინძურება.
Ტექნიკური ინფორმაცია:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG იყენებს ახალ ცხელი დაწყების ფერმენტს, რომელიც იძლევა სწრაფ ცხელ დაწყებას 1~5 წუთში;სპეციალური ბუფერული ფორმულირების საშუალებით იგი ვარგისია მულტიპლექს ფლუორესცენტური რაოდენობრივი PCR რეაქციებისთვის.
2. მას აქვს უფრო მაღალი სპეციფიკა, რაც მნიშვნელოვნად აუმჯობესებს ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR ლიმიტის გამოვლენის მგრძნობელობას, ახდენს ამპლიფიკაციის მრუდების ნორმალიზებას, ფლუორესცენციის მნიშვნელობა იძენს აშკარა გაუმჯობესებას დაბალი კონცენტრაციის შაბლონებში, შესაფერისი როგორც მაღალი მგრძნობელობის ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR გამოვლენის რეაგენტები.
3. პრაიმერებისთვის, რომლებსაც აქვთ დუღილის დაბალი ტემპერატურა ან 200bp-ზე მეტი ფრაგმენტები, რეკომენდებულია 3-საფეხურიანი მეთოდი.
4. dUTP-ის გამოყენების ეფექტურობა და UNG ფერმენტისადმი მგრძნობელობა განსხვავებულია სხვადასხვა სამიზნე გენისთვის, ამიტომ თუ UNG სისტემის გამოყენება იწვევს აღმოჩენის მგრძნობელობის შემცირებას, რეაქციის სისტემა უნდა მორგებული და ოპტიმიზირებული იყოს.თუ საჭიროა ტექნიკური მხარდაჭერა, გთხოვთ დაუკავშირდეთ ჩვენს კომპანიას.
5. გამოიყენეთ გამოყოფილი ადგილები და პიპეტები გამაძლიერებლამდე და მის შემდეგ, ატარეთ ხელთათმანები ოპერაციის დროს და ხშირად შეცვალეთ ისინი;არ გახსნათ რეაქციის მილი PCR-ის დასრულების შემდეგ, რათა მინიმუმამდე დაიყვანოთ ნიმუშების დაბინძურება PCR პროდუქტებით.
