რნასე ა
რიბონუკლეაზა A (RNaseA) არის ერთჯაჭვიანი პოლიპეპტიდი, რომელიც შეიცავს 4 დისულფიდურ ბმას მოლეკულური მასით დაახლოებით 13,7 კდალ.RNase A არის ენდორიბონუკლეაზა, რომელიც სპეციალურად ანადგურებს ერთჯაჭვიან რნმ-ს C და U ნარჩენებზე.კერძოდ, რღვევა ცნობს ნუკლეოტიდის 5'-რიბოზას მიერ წარმოქმნილ ფოსფოდიესტერულ კავშირს და ფოსფატის ჯგუფს მიმდებარე პირიმიდინის ნუკლეოტიდის 3'-რიბოზაზე, ისე, რომ 2, 3'-ციკლური ფოსფატები ჰიდროლიზდება შესაბამის33-მდე. ნუკლეოზიდური ფოსფატები (მაგ. pG-pG-pC-pA-pG იშლება RNase A-ით, რათა გამოიმუშაოს pG-pG-pCp და A-PG).RNase A არის ყველაზე აქტიური ერთჯაჭვიანი რნმ-ის დაშლისას.რეკომენდებული სამუშაო კონცენტრაცია არის 1-100μG/მლ, თავსებადი სხვადასხვა რეაქციის სისტემებთან.მარილის დაბალი კონცენტრაცია (0-100 მმ NaCl) შეიძლება გამოყენებულ იქნას რნმ-დნმ-ის ჰიბრიდიზაციით წარმოქმნილი ერთჯაჭვიანი რნმ, ორჯაჭვიანი რნმ და რნმ-ის ჯაჭვების დასაჭრელად.თუმცა, მარილის მაღალი კონცენტრაციის დროს (≥0.3 M), RNase A მხოლოდ სპეციალურად წყვეტს ერთჯაჭვიან რნმ-ს.
RNase A ყველაზე ხშირად გამოიყენება რნმ-ის მოსაშორებლად პლაზმიდური დნმ-ის ან გენომის დნმ-ის მომზადების დროს. აქტიურია თუ არა DNase მომზადების პროცესში, შეიძლება ადვილად იმოქმედოს რეაქციაზე.წყლის აბაზანაში დუღილის ტრადიციული მეთოდი შეიძლება გამოყენებულ იქნას DNase აქტივობის ინაქტივაციისთვის.ეს პროდუქტი არ შეიცავს დნაზას და პროტეაზას და არ საჭიროებს თერმულ დამუშავებას გამოყენებამდე.გარდა ამისა, ამ პროდუქტის გამოყენება შესაძლებელია მოლეკულური ბიოლოგიის ექსპერიმენტებში, როგორიცაა RNase დაცვის ანალიზი და რნმ თანმიმდევრობის ანალიზი.
შენახვის პირობები
პროდუქტის შენახვა შესაძლებელია -25-15℃ ტემპერატურაზე, მოქმედებს 2 წელი.
ინსტრუქციები
ეს არის ერთ-ერთი გავრცელებული მეთოდი RNase A შენახვის ხსნარის მოსამზადებლად.მისი მომზადება ასევე შესაძლებელიასხვა მეთოდები ლაბორატორიულ ან საცნობარო ლიტერატურაში არსებული ტრადიციული მეთოდების მიხედვით (როგორიცააპირდაპირ იხსნება 10 მმ Tris-HCl, pH 7.5 ან Tris-NaCl ხსნარში)
1. გამოიყენეთ 10 მმ ნატრიუმის აცეტატი (pH 5.2) 10 მგ/მლ RNase A შესანახი ხსნარის მოსამზადებლად.
2. გათბობა 100 ℃ 15 წთ
3. გააგრილეთ ოთახის ტემპერატურამდე, დაამატეთ 1/10 მოცულობის 1 M Tris-HCl (pH 7.4), შეცვალეთ მისი pH 7.4-მდე (ამისთვისმაგალითად, დაამატეთ 500 მლ 10 გ/მლ RNase შესანახი ხსნარი 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. ქვედაფასოება -20℃ გაყინული შენახვისთვის, რომელიც შეიძლება იყოს სტაბილური 2 წლამდე.
[შენიშვნები]: RNaseA ხსნარის ნეიტრალურ პირობებში დუღილისას წარმოიქმნება RNase ნალექი;ადუღეთ დაბალ pH-ზე და ნალექის არსებობის შემთხვევაში შეინიშნება, რაც შესაძლოა გამოწვეული იყოს ცილოვანი მინარევების არსებობით.თუ ნალექი აღმოჩენილია ადუღების შემდეგ, მინარევები შეიძლება მოიხსნას მაღალი სიჩქარით ცენტრიფუგირებით (13000 rpm) და შემდეგ შეიფუთოს ყინვაში შესანახად.
Ინფორმაცია პროდუქციის შესახებ
| სინონიმები | რიბონუკლეაზა I;პანკრეასის რიბონუკლეაზა;რიბონუკლეაზა 3'-პირიმიდნოოლიგონუკლეოტიდოჰიდროლაზა;რნაზა A;ენდორიბონულცეზა I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| გარეგნობა | თეთრი ლიოფილიზებული ფხვნილი |
| Მოლეკულური წონა | ~ 13.7 kDa (ამინომჟავების თანმიმდევრობა) |
| Ph ღირებულება | 7.6 (აქტივობის დიაპაზონი 6-10) |
| შესაფერისი ტემპერატურა | 60℃ (აქტივობის დიაპაზონი 15-70℃) |
| აქტივაციის აგენტი | Na2+.კ+ |
| ინჰიბიტორი | Rnase ინჰიბიტორი |
| ინაქტივაციის მეთოდი | გათბობით ინაქტივაცია შეუძლებელია, რეკომენდებულია ცენტრიფუგის სვეტის გამოყენება |
| წარმოშობა | მსხვილფეხა რქოსანი |
| ხსნადობა | წყალში ხსნადი (10 მგ/მლ) |
| დაკარგვა მშრალზე | ≤5.0% |
| ფერმენტის აქტივობა | ≥60 კუნიცის ერთეული/მგ |
| იზოელექტრული წერტილი | 9.6 |
შენიშვნები
თქვენი უსაფრთხოებისა და ჯანმრთელობისთვის გთხოვთ ატაროთ ლაბორატორიული ხალათები და ერთჯერადი ხელთათმანები ოპერაციისთვის.
