Wild Taq დნმ პოლიმერაზა
Taq დნმ პოლიმერაზა არის თერმოსტაბილური დნმ პოლიმერაზა Thermus aquaticus YT-1-დან, რომელსაც აქვს 5'→3' პოლიმერაზული აქტივობა და 5' ფლაპ ენდონუკლეაზას აქტივობა.
კომპონენტები
| Კომპონენტი | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq ბუფერი | 2×1 მლ | 2×10 მლ | 2×50 მლ | 5×200 მლ |
| Taq დნმ პოლიმერაზა (5 U/μL) | 0,1 მლ | 1 მლ | 5 მლ | 5×10 მლ |
შენახვის მდგომარეობა
ტრანსპორტირება 0°C-ზე და ინახება -25°C~-15°C ტემპერატურაზე.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც აერთიანებს 15 ნმოლ dNTP-ს მჟავაში უხსნად მასალაში 30 წუთში 75°C ტემპერატურაზე.
Ხარისხის კონტროლი
1.პროტეინის სისუფთავის ანალიზი (SDS-PAGE):Taq დნმ პოლიმერაზას სისუფთავე იყო ≥95% განსაზღვრული SDS-PAGE ანალიზით.
2.Endonuclease აქტივობა:მინიმუმ 5 U Taq დნმ პოლიმერაზა 1 μg λDNA 16 საათის განმავლობაში 37 ℃ არ იწვევს გამოვლენილ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
3.ეგზონუკლეაზას აქტივობა:მინიმუმ 5 U Taq დნმ პოლიმერაზა 1 μg λ-Hind Ⅲ დაიჯესტი დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37 ℃ არ იწვევს გამოვლენილ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
4.Nickase Activity:მინიმუმ 5 U Taq დნმ პოლიმერაზა 1 მკგ pBR322 დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
5.RNase აქტივობა:მინიმუმ 5 U Taq დნმ პოლიმერაზა 1.6 μg MS2 RNA 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
6.E. coliდნმ:Taq დნმ პოლიმერაზას 5 U სკრინინგდება E. coli გენომიური დნმ-ის არსებობისთვის TaqMan qPCR-ის გამოყენებით E. coli 16S rRNA ლოკუსისთვის სპეციფიკური პრაიმერებით.E. coli გენომიური დნმ-ის დაბინძურება არის ≤1 ასლი.
7.PCR გაძლიერება (5.0 კბ ლამბდა დნმ)- 50 μL რეაქცია, რომელიც შეიცავს 5 ნგ ლამბდა დნმ-ს 5 ერთეულ Taq დნმ პოლიმერაზასთან ერთად PCR გაძლიერების 25 ციკლისთვის, იწვევს მოსალოდნელ 5.0 კბ პროდუქტს.
რეაქციის დაყენება
| კომპონენტები | მოცულობა |
| შაბლონი დნმa | სურვილისამებრ |
| 10 μM Forward Primer | 1 მლ |
| 10 μM უკუ პრაიმერი | 1 მლ |
| dNTP Mix (თითოეული 10 მმ) | 1 მლ |
| 10×Taq ბუფერი | 5 მლ |
| Taq დნმ პოლიმერაზაბ | 0,25 მლ |
| ნუკლეაზის გარეშე წყალი | 50 მლ-მდე |
შენიშვნები:
1) სხვადასხვა შაბლონების რეაქციის ოპტიმალური კონცენტრაცია განსხვავებულია.შემდეგი ცხრილი გვიჩვენებს შაბლონის რეკომენდებულ გამოყენებას 50 μL რეაქციის სისტემისთვის.
| დნმ | თანხა |
| გენომური | 1 ნგ-1 მკგ |
| პლაზმიდი ან ვირუსული | 1 პგ-1 ნგ |
2) Taq დნმ პოლიმერაზას ოპტიმალური კონცენტრაცია შეიძლება მერყეობდეს 0,25 μL~1 μL-დან სპეციალიზებულ პროგრამებში.
რეაქციაპროგრამა
| ნაბიჯი | ტემპერატურა(°C) | დრო | ციკლები |
| საწყისი დენატურაციაa | 95 ℃ | 5 წთ | - |
| დენატურაცია | 95 ℃ | 15-30 წმ | 30-35 ციკლი |
| ანეილირებაბ | 60 ℃ | 15 წ | |
| გაფართოება | 72 ℃ | 1კბ/წთ | |
| საბოლოო გაფართოება | 72 ℃ | 5 წთ | - |
შენიშვნები:
1) დენატურაციის საწყისი მდგომარეობა შესაფერისია ამპლიფიკაციის რეაქციების უმეტესობისთვის და შეიძლება შეიცვალოს შაბლონის სტრუქტურის სირთულის მიხედვით.თუ შაბლონის სტრუქტურა რთულია, დენატურაციის წინასწარი დრო შეიძლება გაგრძელდეს 5-10 წუთამდე, რათა გაუმჯობესდეს დენატურაციის საწყისი ეფექტი.
2) ანეილირების ტემპერატურა უნდა დარეგულირდეს პრაიმერის Tm მნიშვნელობის მიხედვით, რომელიც ჩვეულებრივ დაყენებულია 3~5 ℃ პრაიმერის Tm მნიშვნელობაზე დაბალი;კომპლექსური შაბლონებისთვის აუცილებელია ანეილის ტემპერატურის დარეგულირება და გაფართოების დროის გახანგრძლივება ეფექტური გაძლიერების მისაღწევად.
