რნაზის ინჰიბიტორი (გლიცეროლის გარეშე)
თაგვის RNase ინჰიბიტორი არის რეკომბინანტული თაგვის RNase ინჰიბიტორი, რომელიც გამოხატულია და გაწმენდილია E.coli-სგან.ის აკავშირებს RNase A, B ან C-ს 1:1 თანაფარდობით არაკოვალენტური კავშირის მეშვეობით, რითაც აფერხებს სამი ფერმენტის აქტივობას და იცავს რნმ-ს დეგრადაციისგან.თუმცა, ის არ არის ეფექტური RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ან RNase ასპერგილუსისგან.თხის RNase ინჰიბიტორი გამოკვლეული იყო RT-PCR, RT-qPCR და IVT mRNA-ით და იყო თავსებადი სხვადასხვა კომერციულ უკუ ტრანსკრიპტაზებთან, დნმ პოლიმერაზებთან და რნმ პოლიმერაზებთან.
ადამიანის RNase ინჰიბიტორებთან შედარებით, თაგვის RNase ინჰიბიტორი არ შეიცავს ორ ცისტეინს, რომლებიც ძალიან მგრძნობიარეა დაჟანგვის მიმართ, რაც იწვევს ინჰიბიტორის ინაქტივაციას.რაც მას სტაბილურს ხდის DTT-ის დაბალ კონცენტრაციებში (1 მმ-ზე ნაკლები).ეს მახასიათებელი ხდის მას გამოსაყენებლად რეაქციებში, სადაც DTT-ის მაღალი კონცენტრაცია უარყოფითად მოქმედებს რეაქციაზე (მაგ. რეალურ დროში RT-PCR).
Aგანაცხადი
ეს პროდუქტი შეიძლება ფართოდ იქნას გამოყენებული ნებისმიერ ექსპერიმენტში, სადაც RNase ჩარევა შესაძლებელია რნმ-ის დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად, როგორიცაა:
1.პირველი ჯაჭვის cDNA სინთეზი, RT-PCR, RT-qPCR და ა.შ.;
2. რნმ-ის დაცვა ინ-ვიტრო ტრანსკრიფციის/თარგმნის დეგრადაციისგან (მაგ. ვირუსის რეპლიკაცია ინ ვიტრო);
3.RNase აქტივობის დათრგუნვა რნმ-ის იზოლაციისა და გაწმენდის დროს.
შენახვის პირობები
ინახება -25-15℃-ზე;
გაყინვა-დათბობის ციკლები ≤ 5-ჯერ;
მოქმედებს 1 წელი.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც RNase ინჰიბიტორის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 5 ნგ RNase A-ს აქტივობის 50%-ით ინჰიბირებისთვის.
Მოლეკულური წონა
RNase ინჰიბიტორი (გლიცეროლის გარეშე) არის 50 kDa ცილა.
Ხარისხის კონტროლი
ეგზონუკლეაზა აქტივობა:
40 U ფერმენტის ინკუბაცია 1 μg λ-Hind III დაიჯესტის დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე არ მოჰყვა დნმ-ის შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც ეს განისაზღვრება გელის ელექტროფორეზით.
ენდონუკლეაზის აქტივობა:
40 U ფერმენტის ინკუბაცია 1 μg λ დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე არ მოჰყვა დნმ-ის შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც ეს განისაზღვრება გელის ელექტროფორეზით.
ნიკინგი აქტივობა:
40 U ფერმენტის ინკუბაცია 1 μg pBR322-ით 16 საათის განმავლობაში 37℃ ტემპერატურაზე არ მოჰყვა დნმ-ის შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც ეს განისაზღვრება გელის ელექტროფორეზით.
RNase აქტივობა:
ფერმენტის 40 U ინკუბაციამ 1.6 μg MS2 რნმ-ით 4 საათის განმავლობაში 37℃ ტემპერატურაზე არ გამოიწვია რნმ-ის შესამჩნევი დეგრადაცია, როგორც ეს განისაზღვრება გელის ელექტროფორეზით.
E.coli დნმ:
40 U ფერმენტი აღმოჩენილია TaqMan qPCR-ით.E.coli დნმ არის ≤ 0. 1pg/40U.
Nოტეs
1. არ შეანჯღრიოთ და არ აურიოთ ძლიერად ფერმენტის ინაქტივაციის თავიდან ასაცილებლად.
2.RNase ინჰიბიტორი აქტიურია 25℃-დან 55℃-მდე ტემპერატურაზე და ინაქტივირებულია ≥65℃-ზე.
3. RNase H, RNase 1 და RNase T1 აქტივობა არ არის დათრგუნული.
4. RNase აქტივობის ინჰიბირებისთვის pH დიაპაზონი ფართოა (აქტიური pH 5-9-ზე), ავლენს მაქსიმალურ აქტივობას pH 7-8-ზე.
