ურაცილის დნმ გლიკოზილაზა
ურაცილ-დნმ გლიკოზილაზა (UNG ან UDG) არის E.coli-ის რეკომბინანტული კლონი, რომლის მოლეკულური წონაა 25 kDa.ის აკატალიზებს თავისუფალი ურაცილის გამოყოფას ურაცილის შემცველი ერთჯაჭვიანი და ორჯაჭვიანი დნმ-დან და არააქტიურია რნმ-ის მიმართ და შეიძლება გამოყენებულ იქნას PCR გამაძლიერებელი პროდუქტების დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად.მოქმედების პრინციპი ემყარება იმ ფაქტს, რომ თუ dUTP ჩაანაცვლებს dTTP-ს PCR რეაქციაში და წარმოიქმნება PCR გამაძლიერებელი პროდუქტი, რომელიც შეიცავს dU ბაზებს, ფერმენტს შეუძლია შერჩევით დაარღვიოს U ფუძეების გლიკოზიდური ბმა ერთჯაჭვიან და ორჯაჭვიანში. დნმ და დეგრადაცია PCR გამაძლიერებელი პროდუქტი.
რეკომენდებული აპლიკაცია
დაბინძურების პრევენციის გაძლიერება
შენახვის მდგომარეობა
-20°C ხანგრძლივი შენახვისთვის, გამოყენებამდე კარგად უნდა იყოს შერეული, მოერიდეთ ხშირი გაყინვა-დათბობას.
შენახვის ბუფერი
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, სტაბილიზატორი, 50% გლიცეროლი.
ერთეულის განმარტება
ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 1 მკგ დU ფუძეების შემცველი ერთჯაჭვიანი დნმ-ის დასაშლელად 1 საათში 37°C ტემპერატურაზე არის 1 ერთეული.
Ხარისხის კონტროლი
1.SDS-PAGE ელექტროფორეზული სისუფთავე 98%-ზე მეტი
2.გამაძლიერებელი მგრძნობელობა, პარტია-სერიული კონტროლი, სტაბილურობა
3.მას შემდეგ, რაც 1U UNG დამუშავდება 50℃ ტემპერატურაზე 2 წუთის განმავლობაში, შაბლონი, რომელიც შეიცავს U 103 ეგზემპლარს ქვემოთ უნდა იყოს მთლიანად დეგრადირებული და ვერ იქნება გამაძლიერებელი პროდუქტის წარმოება.
4.არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა
ინსტრუქციები
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 10 × PCR ბუფერი (dNTP თავისუფალი, Mg²+უფასო) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 მკმ |
| dUTP (ჩანაცვლება dTTP) | - | 200-600 მკმ |
| 25 მმ MgCl2 | 2-8 მლ | 1-4 მმ |
| 5 ე/მკლ ტაკ | 0.25 | 1.25 U |
| 5 ე/მკლ UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × პრაიმერის მიქსია | 2 | 1× |
| შაბლონი | - | ＜1მკგ/რეაქცია |
| ddH2O | 50-მდე | - |
Შენიშვნა: a: თუ გამოიყენება qPCR/qRT-PCR-სთვის, ფლუორესცენტური ზონდი უნდა დაემატოს რეაქციის სისტემას.ჩვეულებრივ, პრაიმერის საბოლოო კონცენტრაცია 0.2 μM-ს შეუძლია კარგი შედეგის მოცემა;როდესაც რეაქცია ცუდია, პრაიმერის კონცენტრაცია შეიძლება დარეგულირდეს 0,2-1 μM დიაპაზონში.ჩვეულებრივ, ზონდის კონცენტრაცია ოპტიმიზებულია 0.1-0.3 μM დიაპაზონში.კონცენტრაციის გრადიენტის ექსპერიმენტები შეიძლება ჩატარდეს პრაიმერისა და ზონდის საუკეთესო კომბინაციის მოსაძებნად.
შენიშვნები
1.UNG ფერმენტი შეიძლება გამოყენებულ იქნას დაბინძურებული dUTP ამპლიფიკაციის პროდუქტების ამოსაღებად რეაქციის სისტემიდან PCR გაძლიერების რეაქციამდე, შემდეგ პროდუქტის დაბინძურების გამო ცრუ დადებითი შედეგების თავიდან ასაცილებლად.
2.ოპტიმალური ტემპერატურა UNG ფერმენტისთვის, რომელიც გამოიყენება დაბინძურების საწინააღმდეგო PCR რეაქციაში არის 50℃ 2 წუთის განმავლობაში;ინაქტივაციის მდგომარეობაა 95℃ 5 წუთის განმავლობაში.
3.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას და არ ექვემდებარებოდეთ ტემპერატურის დიდ რყევებს.
4.გასაძლიერებელ სხვადასხვა გენს აქვს dUTP-ის გამოყენების განსხვავებული ეფექტურობა და UNG ფერმენტის მიმართ მგრძნობელობა, ამიტომ, თუ UNG სისტემის გამოყენება იწვევს გამოვლენის მგრძნობელობის შემცირებას, რეაქციის სისტემა უნდა დარეგულირდეს და ოპტიმიზირებული იყოს. თუ გჭირდებათ ტექნიკური მხარდაჭერა, გთხოვთ დაუკავშირდეთ ჩვენი კომპანია.
