თაგვის გენოტიპის ნაკრები

კატის ნომერი: HCR2021A

ეს პროდუქტი არის ნაკრები, რომელიც შექმნილია თაგვის გენოტიპების სწრაფი იდენტიფიკაციისთვის, დნმ-ის ნედლი ექსტრაქციისა და PCR გაძლიერების სისტემის ჩათვლით.პროდუქტის გამოყენება შესაძლებელია PCR გაძლიერებისთვის პირდაპირ თაგვის კუდიდან, ყურიდან, ფეხის თითებიდან და სხვა ქსოვილებიდან, ლიზის ბუფერით და პროტეინაზა k-ით მარტივი გაყოფის შემდეგ.არ არის ღამის მონელება, ფენოლ-ქლოროფორმის მოპოვება ან სვეტის გაწმენდა, რაც მარტივია და ამცირებს ექსპერიმენტების დროს.პროდუქტი შესაფერისია 2 კბ-მდე სამიზნე ფრაგმენტების გაძლიერებისთვის და მულტიპლექსური PCR რეაქციებისთვის 3 წყვილამდე პრაიმერით.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix შეიცავს გენმოდიფიცირებულ დნმ პოლიმერაზას, Mg²⁺, dNTP და ოპტიმიზებული ბუფერული სისტემა, რათა უზრუნველყოს მაღალი გამაძლიერებელი ეფექტურობა და ინჰიბიტორების ტოლერანტობა, ასე რომ PCR რეაქციები შეიძლება განხორციელდეს შაბლონისა და პრაიმერების დამატებით და პროდუქტის რეჰიდრატაციით 1×.ამ პროდუქტით გაძლიერებულ PCR პროდუქტს აქვს გამოკვეთილი "A" ბაზა 3' ბოლოზე და შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ TA კლონირებისთვის გაწმენდის შემდეგ.

კომპონენტები

შენახვის პირობები

პროდუქტები უნდა ინახებოდეს -25~-15℃ ტემპერატურაზე 2 წლის განმავლობაში.გალღობის შემდეგ, ლიზისის ბუფერი შეიძლება ინახებოდეს 2~8℃ ტემპერატურაზე მოკლევადიანი მრავალჯერადი გამოყენებისთვის და კარგად აურიეთ გამოყენებისას.

განაცხადი

ეს პროდუქტი შესაფერისია თაგვის ნოკაუტის ანალიზისთვის, ტრანსგენის გამოვლენისთვის, გენოტიპისთვის და ა.შ.

მახასიათებლები

1.მარტივი ოპერაცია: არ არის საჭირო გენომის დნმ-ის ამოღება;

2.ფართო გამოყენება: შესაფერისია თაგვის სხვადასხვა ქსოვილის პირდაპირი გაძლიერებისთვის.

ინსტრუქციები

1.გენომიური დნმ-ის გათავისუფლება

1) ლიზატის მომზადება

ქსოვილის ლიზატი მზადდება თაგვის გასაწმენდი ნიმუშების რაოდენობის მიხედვით (ქსოვილის ლიზატი უნდა მომზადდეს ადგილზე დოზის მიხედვით და საფუძვლიანად იყოს შერეული გამოსაყენებლად), ხოლო ერთი ნიმუშისთვის საჭირო რეაგენტების პროპორცია ასეთია:

2) ნიმუშის მომზადება და ლიზისი

რეკომენდებული ქსოვილის გამოყენება

აიღეთ თაგვის ქსოვილის ნიმუშების სათანადო რაოდენობა სუფთა ცენტრიფუგის მილებში, დაამატეთ 200 μL ახალი ქსოვილის ლიზატი თითოეულ ცენტრიფუგის მილში, მორევა და შეანჯღრიეთ, შემდეგ ინკუბაცია 55℃-ზე 30 წუთის განმავლობაში და შემდეგ გააცხელეთ 98℃-ზე 3 წუთის განმავლობაში.

3) ცენტრიფუგაცია

კარგად შეანჯღრიეთ ლიზატი და ცენტრიფუგა 12000 rpm-ზე 5 წუთის განმავლობაში.სუპერნატანტი შეიძლება გამოყენებულ იქნას, როგორც შაბლონი PCR გაძლიერებისთვის.თუ შაბლონი საჭიროა შესანახად, გადაიტანეთ სუპერნატანტი სხვა სტერილურ ცენტრიფუგა მილში და შეინახეთ -20℃ ტემპერატურაზე 2 კვირის განმავლობაში.

2.PCR გაძლიერება

ამოიღეთ 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix-დან -20℃ და გალღვეთ ყინულზე, აურიეთ თავდაყირა და მოამზადეთ PCR რეაქციის სისტემა შემდეგი ცხრილის მიხედვით (იმოქმედეთ ყინულზე):

Შენიშვნა:

ა) დამატებული რაოდენობა არ უნდა აღემატებოდეს სისტემის 1/10-ს და თუ ძალიან ბევრი დაემატა, PCR გაძლიერება შეიძლება შეფერხდეს.

რეკომენდებული PCR პირობები

Შენიშვნა:

ა) დუღილის ტემპერატურა: პრაიმერის Tm მნიშვნელობის მითითებით, რეკომენდებულია დუღილის ტემპერატურის დაყენება პრაიმერის უფრო მცირე Tm მნიშვნელობაზე +3~5℃.

საერთო პრობლემები და გადაწყვეტილებები

1.არ არის მიზანმიმართული ზოლები

1) გადაჭარბებული ლიზის პროდუქტი.აირჩიეთ შაბლონის ყველაზე შესაფერისი რაოდენობა, როგორც წესი, სისტემის არაუმეტეს 1/10;

2) ნიმუშის ძალიან დიდი ზომა.გააზავეთ ლიზატი 10-ჯერ და შემდეგ გააძლიერეთ, ან შეამცირეთ ნიმუშის ზომა და ხელახლა გაალიზეთ;

3) ქსოვილის ნიმუშები არ არის ახალი.რეკომენდებულია ქსოვილის ახალი ნიმუშების გამოყენება;

4) პრაიმერის ცუდი ხარისხი.გამოიყენეთ გენომის დნმ ამპლიფიკაციისთვის პრაიმერის ხარისხის შესამოწმებლად და პრაიმერის დიზაინის ოპტიმიზაციისთვის.

2.არასპეციფიკური გაძლიერება

1) ანეილირების ტემპერატურა ძალიან დაბალია და ციკლის რაოდენობა ძალიან მაღალი.გაზარდეთ დამუშავების ტემპერატურა და შეამცირეთ ციკლების რაოდენობა;

2) შაბლონის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია.შეამცირეთ შაბლონის რაოდენობა ან გააზავეთ თარგი 10-ჯერ გაძლიერების შემდეგ;

3) პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა.პრაიმერის დიზაინის ოპტიმიზაცია.

შენიშვნები

1.ნიმუშებს შორის ჯვარედინი დაბინძურების თავიდან აცილების მიზნით, უნდა მომზადდეს ნიმუშების აღების მრავალი ხელსაწყო, ხოლო ხელსაწყოების ზედაპირი შეიძლება გაიწმინდოს 2% ნატრიუმის ჰიპოქლორიტის ხსნარით ან ნუკლეინის მჟავას გამწმენდით ყოველი ნიმუშის აღების შემდეგ, თუ საჭიროა განმეორებითი გამოყენება.

2.რეკომენდირებულია თაგვის ახალი ქსოვილების გამოყენება და სინჯის მოცულობა არ უნდა იყოს ძალიან დიდი, რათა არ მოხდეს გაძლიერების შედეგებზე ზემოქმედება.

3.Lysis Buffer თავიდან უნდა იქნას აცილებული ხშირი გაყინვა-დათბობა და შეიძლება ინახებოდეს 2~8℃ ტემპერატურაზე მოკლევადიანი მრავალჯერადი გამოყენებისთვის.თუ ინახება დაბალ ტემპერატურაზე, შეიძლება მოხდეს ნალექი, რომელიც სრულად უნდა დაიშალა გამოყენებამდე.

4.PCR Mix თავიდან უნდა იქნას აცილებული ხშირი გაყინვა-დათბობა და მისი შენახვა შესაძლებელია 4℃ ტემპერატურაზე მოკლევადიანი განმეორებითი გამოყენებისთვის.

5.ეს პროდუქტი განკუთვნილია მხოლოდ სამეცნიერო ექსპერიმენტული კვლევისთვის და არ უნდა იქნას გამოყენებული კლინიკურ დიაგნოსტიკაში ან მკურნალობაში.