UDG/UNG ფერმენტები
UDG-ს (ურაცილის დნმ გლიკოზილაზას) შეუძლია N-გლიკოზიდური კავშირის ჰიდროლიზის კატალიზირება ურაცილის ფუძესა და შაქარ-ფოსფატის ხერხემალს შორის ssDNA და dsDNA-ში.მას შეუძლია ადვილად აკონტროლოს აეროზოლური დაბინძურება და შესაფერისია საერთო მოლეკულური ბიოლოგიის სისტემებისთვის, როგორიცაა PCR, qPCR, RT-qPCR და LAMP.
სპეციფიკაციები
| გამოხატვის მასპინძელი | რეკომბინანტული E. coli ურაცილის დნმ გლიკოზილაზას გენით |
| Მოლეკულური წონა | 24. 8kDa |
| სიწმინდე | ≥95% (SDS-PAGE) |
| სითბოს ინაქტივაცია | 95℃, 5~10 წთ |
| ერთეულის განმარტება | ერთი ერთეული (U) განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა l μg dU-ს შემცველი dsDNA ჰიდროლიზის კატალიზებისთვის 30 წუთში 25℃ ტემპერატურაზე. |
შენახვა
პროდუქტი უნდა ინახებოდეს -25℃~-15°C ტემპერატურაზე ორი წლის განმავლობაში.
ინსტრუქციები
1.PCR რეაქციის ნარევის მომზადება შემდეგი სისტემის მიხედვით
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 10×PCR ბუფერი (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 მმოლ/LMgCl | 3 | 1,5 მმოლ/ლ |
| dUTP (10 მმოლ/ლ) | 3 | 0.6 მმოლ/ლ |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 მმოლ/ლეჩი) | 1 | 0.2 მმოლ/ლიჩი |
| შაბლონი დნმ | X | - |
| პრაიმერი 1 (10 მკმოლ/ლ) | 2 | 0.4 მკმოლ/ლ |
| პრაიმერი 2 (10 μmol/L) | 2 | 0.4 მკმოლ/ლ |
| Taq დნმ პოლიმერაზა (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 ე/მკლ |
| ურაცილის დნმ გლიკოზილაზა (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 ე/მკლ |
| ddH2O | 50-მდე | - |
Შენიშვნა: ექსპერიმენტული მოთხოვნების მიხედვით, dUTP-ის საბოლოო კონცენტრაცია შეიძლება დარეგულირდეს 0,2-0,6 მმოლ/ლ შორის, ხოლო 0,2 მმოლ/ლ dTTP შეიძლება დაემატოს შერჩევით.
2.გაძლიერების პროცედურა
| ციკლის ნაბიჯი | ტემპერატურა | დრო | ციკლები |
| dU შემცველი შაბლონის დეგრადაცია | 25℃ | 10 წთ | 1 |
| UDG აქტივაცია, შაბლონის საწყისი დენატურაცია | 95℃ | 5-10 წუთი | 1 |
| დენატურაცია | 95℃ | 10 წმ |
30-35 |
| ანეილირება | 60℃ | 20 წმ | |
| გაფართოება | 72℃ | 30 წმ/კბ | |
| საბოლოო გაფართოება | 72℃ | 5 წუთი | 1 |
Შენიშვნა: რეაქციის დრო 25°C-ზე შეიძლება დარეგულირდეს 5-10 წუთში ექსპერიმენტული მოთხოვნების შესაბამისად.
შენიშვნები
1.UDG აქტიურია PCR რეაქციის ბუფერების უმეტესობაში.
2.გამოყენებისას ფერმენტები უნდა ინახებოდეს ყინულის ყუთში ან ყინულის აბაზანაზე და უნდა ინახებოდეს გამოყენების შემდეგ -20°C ტემპერატურაზე.
3.გთხოვთ, ატაროთ საჭირო PPE, ასეთი ლაბორატორიული ქურთუკი და ხელთათმანები თქვენი ჯანმრთელობისა და უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად!
