Multiplex qPCR Probe Premix
კატის ნომერი: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (საღებავებზე დაფუძნებული) არის წინასწარი ხსნარი 2 × რეალურ დროში რაოდენობრივი PCR გაძლიერებისთვის, რომელიც ხასიათდება მაღალი მგრძნობელობითა და სპეციფიკურობით, რომელიც ლურჯი ფერისაა და აქვს ნიმუშის დამატების ეფექტი.ეს პროდუქტი არის 2× Mix წინასწარ შერეული რეაგენტი, რომელიც იძლევა ოთხამდე ფლუორესცენტულ რაოდენობრივ PCR რეაქციას ერთ რეაქციის ჭაბურღილში.ეს პროდუქტი შეიცავს გენეტიკურად მოდიფიცირებულ ანტისხეულების მეთოდს Taq ფერმენტისთვის, რომელიც მნიშვნელოვნად აუმჯობესებს გაძლიერების მგრძნობელობას და სპეციფიკას.ამავდროულად, ამ პროდუქტმა ღრმად მოახდინა მრავალრეაქციის ბუფერის ოპტიმიზაცია, რომელსაც შეუძლია გააუმჯობესოს რეაქციის გამაძლიერებელი ეფექტურობა და ხელი შეუწყოს დაბალი კონცენტრაციის შაბლონების ეფექტურ გაძლიერებას.ეს პროდუქტი შეიძლება გამოყენებულ იქნას გენოტიპაციისა და მულტიპლექსური რაოდენობრივი ანალიზისთვის.
სპეციფიკაცია
| ცხელი დაწყება | ჩაშენებული ცხელი დაწყება |
| გამოვლენის მეთოდი | პრაიმერი-ზონდის გამოვლენა |
| PCR მეთოდი | qPCR |
| პოლიმერაზა | Taq დნმ პოლიმერაზა |
| ნიმუშის ტიპი | დნმ |
შენახვის პირობები
პროდუქტი იგზავნება მშრალი ყინულით და შეიძლება ინახებოდეს -25~-15℃ ტემპერატურაზე 2 წლის განმავლობაში.
ინსტრუქციები
1. რეაქციასისტემა
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| პრაიმერის ნარევი (10 მკმოლ/ლ) a | × | 0,1 - 0,5 მკმოლ/ლ |
| ზონდის ნარევი (10 მკმოლ/ლ)b | × | 50 - 250 ნმოლ/ლ |
| Rox საცნობარო საღებავი | 0.5 | 1× |
| შაბლონი დნმ/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | 25-მდე | - |
შენიშვნები:გამოყენებამდე კარგად აურიეთ, რათა თავიდან აიცილოთ ზედმეტი ბუშტები ძლიერი შერყევისგან.
ა.პრაიმერის კონცენტრაცია: პრაიმერის მიქსი შეიცავს პრაიმერის მრავალ წყვილს, როგორც წესი, თითოეული პრაიმერი საბოლოო კონცენტრაციით არის 0.2 μmol/L და ასევე შეიძლება დარეგულირდეს 0.1-დან 0.5 μmol/L-მდე, როგორც საჭიროა.
ბ.ზონდის კონცენტრაცია: Probe Mix შეიცავს მრავალ ზონდს სხვადასხვა ფლუორესცენტური სიგნალით და თითოეული ზონდის კონცენტრაცია შეიძლება დარეგულირდეს 50-დან 250 ნმოლ/ლ-მდე, კონკრეტული სიტუაციის მიხედვით.
1.Rox საღებავის მითითება: ის გამოიყენება რეალურ დროში PCR გამაძლიერებელი ინსტრუმენტზე, როგორიცაა Applied Biosystems ჭაბურღილებს შორის წარმოქმნილი ფლუორესცენტური სიგნალის შეცდომის გამოსასწორებლად;ეს პროდუქტი არ შეიცავს Rox საღებავის მითითებას.საჭიროების შემთხვევაში რეკომენდებულია Cas#10200.
2.შაბლონის განზავება: qPCR ძალიან მგრძნობიარეა და რეკომენდებულია შაბლონის განზავება გამოსაყენებლად.თუ შაბლონი არის cDNA მარაგის ხსნარი, შაბლონის მოცულობა არ უნდა აღემატებოდეს მთლიანი მოცულობის 1/10-ს.
3.რეაქციის სისტემა: 25 μL, 30 μL ან 50 μL რეკომენდებულია სამიზნე გენის გაძლიერების ეფექტურობისა და განმეორებადობის უზრუნველსაყოფად.
4.სისტემის მომზადება: გთხოვთ, მოამზადოთ სუპერ სუფთა სკამზე და გამოიყენოთ წვერები და რეაქციის მილები ნუკლეაზის ნარჩენების გარეშე;რეკომენდებულია რჩევების გამოყენება ფილტრის ვაზნებით.მოერიდეთ ჯვარედინი დაბინძურებას და აეროზოლებით დაბინძურებას.
2.რეაქციის პროგრამა
| ციკლის ნაბიჯი | Ტემპი. | დრო | ციკლები |
| საწყისი-დენატურაცია | 95 ℃ | 5 წთ | 1 |
| დენატურაცია | 95 ℃ | 15 წმ | 45 |
| ანეილირება/გაფართოება | 60 ℃ | 30 წმ |
შენიშვნები:
1.ანეილირება/გაფართოება: ტემპერატურა და დრო შეიძლება სათანადოდ დარეგულირდეს პრაიმერის Tm მნიშვნელობის მიხედვით.
2.ფლუორესცენციის სიგნალის მიღება: ფლუორესცენციის სიგნალის მიღების დრო, რომელიც საჭიროა სხვადასხვა qPCR აღმოჩენის ინსტრუმენტებისთვის, განსხვავებულია, გთხოვთ დააყენოთ მინიმალური დროის ლიმიტის მიხედვით.რამდენიმე ჩვეულებრივი ინსტრუმენტის დრო დადგენილია შემდეგნაირად:
20 წმ: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 წმ: Applied Biosystems 7300
32 წმ: Applied Biosystems 7500
შენიშვნები
გთხოვთ, ატაროთ საჭირო PPE, ასეთი ლაბორატორიული ქურთუკი და ხელთათმანები თქვენი ჯანმრთელობისა და უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად!
