M-MLV Neoscript უკუ ტრანსკრიპტაზა

Neoscript უკუ ტრანსკრიპტაზა არის უკუ ტრანსკრიპტაზა, რომელიც მიიღება Moloney თაგვური ლეიკემიის ვირუსის წარმოშობისა და გამოხატვის M-MLV გენის მუტაციური სკრინინგით E.coli-ში.ფერმენტი შლის RNase H აქტივობას, აქვს უფრო მაღალი ტემპერატურის ტოლერანტობა და შესაფერისია მაღალი ტემპერატურის საპირისპირო ტრანსკრიფციისთვის.ამიტომ, ის სასარგებლოა რნმ-ის მაღალი დონის სტრუქტურისა და არასპეციფიკური ფაქტორების არახელსაყრელი ეფექტების აღმოსაფხვრელად cDNA-ს სინთეზზე და აქვს უფრო მაღალი სტაბილურობა და საპირისპირო ტრანსკრიფციის სინთეზის უნარი.ფერმენტს აქვს უმაღლესი სტაბილურობა და საპირისპირო ტრანსკრიფციის სინთეზის უნარი.

კომპონენტები

1.200 ე/მკლ ნეოსკრიპტის უკუ ტრანსკრიპტაზა

2.5 × პირველი ზოლის ბუფერი (სურვილისამებრ)

* 5 × პირველი ჯაჭვის ბუფერი არ შეიცავს dNTP, გთხოვთ, დაამატოთ dNTP რეაქციის სისტემის მომზადებისას

რეკომენდებული აპლიკაცია

1.ერთსაფეხურიანი qRT-PCR.

2.რნმ ვირუსის გამოვლენა.

შენახვის მდგომარეობა

-20°C ხანგრძლივი შენახვისთვის, გამოყენებამდე კარგად უნდა იყოს შერეული, მოერიდეთ ხშირი გაყინვა-დათბობას.

ერთეულის განმარტება

ერთი ერთეული შეიცავს 1 ნმოლ dTTP-ს 10 წუთში 37°C-ზე პოლი(A)•oligo(dT) გამოყენებით.₂₅როგორც შაბლონი/პრაიმერი.

Ხარისხის კონტროლი

1.SDS-PAGE ელექტროფორეზული სისუფთავე 98%-ზე მეტი.

2.გამაძლიერებელი მგრძნობელობა, პარტია-სერიული კონტროლი, სტაბილურობა.

3.არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა, არ არის ეგზოგენური ენდონუკლეაზა ან ეგზონუკლეაზა დაბინძურება

რეაქციის დაყენება პირველი ჯაჭვური რეაქციის ხსნარისთვის

1.სარეაქციო ნარევის მომზადება

შენიშვნები:a/b: გთხოვთ, აირჩიოთ სხვადასხვა ტიპის პრაიმერები თქვენი ექსპერიმენტული საჭიროებების მიხედვით.

2.გააცხელეთ 65°C-ზე 5 წუთის განმავლობაში და სწრაფად გააგრილეთ ყინულზე 2 წუთის განმავლობაში.

3.დაამატეთ შემდეგი კომპონენტები ზემოხსენებულ სისტემას მთლიანი მოცულობა 20 μL და ნაზად აურიეთ:

4. გთხოვთ, შეასრულოთ რეაქცია შემდეგი პირობების მიხედვით:

(1) თუ შემთხვევითი პრაიმერი გამოიყენება, რეაქცია უნდა განხორციელდეს 25℃ 10 წუთის განმავლობაში და შემდეგ 50℃ 30-60 წუთის განმავლობაში;

(2) თუ გამოიყენება Oligo dT ან სპეციფიკური პრაიმერები, რეაქცია უნდა განხორციელდეს 50℃ ტემპერატურაზე 30-60 წუთის განმავლობაში.

5.გაათბეთ 95℃-ზე 5 წუთის განმავლობაში ნეოსკრიპტის საპირისპირო ტრანსკრიპტაზის ინაქტივაციისთვის და რეაქციის შეწყვეტისთვის.

6.საპირისპირო ტრანსკრიფციის პროდუქტები შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ PCR რეაქციაში და ფლუორესცენციულ რაოდენობრივ PCR რეაქციაში, ან ინახება -20℃-ზე დიდი ხნის განმავლობაში.

PCR Rმოქმედება:

1.სარეაქციო ნარევის მომზადება

შენიშვნები:a: თუ ძალიან ბევრი პირველი ჯაჭვური რეაქციის ხსნარი დაემატება, PCR რეაქცია შეიძლება შეფერხდეს.

2.PCR რეაქციის პროცედურა

შენიშვნები

1.ვარგისია საპირისპირო ტრანსკრიფციის ტემპერატურის ოპტიმიზაციისთვის 42℃~55℃ დიაპაზონში.

2.მას აქვს უკეთესი სტაბილურობა, შესაფერისია მაღალი ტემპერატურის საპირისპირო ტრანსკრიფციის გაძლიერებისთვის.გარდა ამისა, ის ხელსაყრელია რნმ-ის რთული სტრუქტურული რეგიონების ეფექტურად გავლისთვის.ასევე, ისშესაფერისია ერთსაფეხურიანი მულტიპლექსური ფლუორესცენციის რაოდენობრივი RT-PCR გამოვლენისთვის.

3.კარგი თავსებადობა სხვადასხვა PCR ამპლიფიკაციის ფერმენტებთან და შესაფერისია მაღალი მგრძნობელობის RT-PCR რეაქციებისთვის.

4.ვარგისია მაღალი მგრძნობელობის ერთსაფეხურიანი ფლუორესცენციის რაოდენობრივი RT-PCR რეაქციისთვის, ეფექტურად აუმჯობესებს შაბლონების დაბალი კონცენტრაციის გამოვლენის სიჩქარეს.

5.ვარგისია cDNA ბიბლიოთეკის კონსტრუქციისთვის.