DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
კატის ნომერი: HC4007A
დნაზა I (დეოქსირიბონუკლეაზა I) არის ენდოდეოქსირიბონუკლეაზა, რომელსაც შეუძლია ერთჯაჭვიანი ან ორჯაჭვიანი დნმ-ის მონელება.ის ცნობს და წყვეტს ფოსფოდიესტერულ ობლიგაციებს, რათა წარმოქმნას მონოდეოქსინუკლეოტიდები ან ერთჯერადი ან ორჯაჭვიანი ოლიგოდეოქსინუკლეოტიდები ფოსფატური ჯგუფებით 5'-ტერმინალზე და ჰიდროქსილით 3'-ტერმინალზე.DNase I-ის აქტივობა დამოკიდებულია Ca-ზე2+და შეიძლება გააქტიურდეს ორვალენტიანი ლითონის იონებით, როგორიცაა Mn2+და ზნ2+.5 მმ Ca2+იცავს ფერმენტს ჰიდროლიზისგან.Mg-ის თანდასწრებით2+ფერმენტს შეუძლია შემთხვევით ამოიცნოს და გაჭრას ნებისმიერი ადგილი დნმ-ის რომელიმე ჯაჭვზე.მნ2+, დნმ-ის ორმაგი ჯაჭვები შეიძლება ერთდროულად ამოიცნონ და გაიჭრას თითქმის ერთსა და იმავე ადგილას, რათა ჩამოყალიბდეს ბრტყელი ბოლოების დნმ-ის ფრაგმენტები ან წებოვანი ბოლო დნმ-ის ფრაგმენტები 1-2 ნუკლეოტიდით ამობურცული.
კომპონენტები
| სახელი | 0.1 KU | 1KU | 5 კუ | 50 კუ |
| DNase I, RNase თავისუფალი | 20 მკლ | 200 მლ | 1მლ | 10 მლ |
| 10×DNase I ბუფერი | 1მლ | 1მლ | 5 × 1 მლ | 5 × 10 მლ |
შენახვის პირობები
-25℃~-15℃ შესანახად;ტრანსპორტირება ყინულის პაკეტების ქვეშ.
ინსტრუქციები
1. მოამზადეთ რეაქციის ხსნარი RNase-გან თავისუფალ მილში ქვემოთ ჩამოთვლილი პროპორციების მიხედვით:
| Კომპონენტი | მოცულობა |
| რნმ | X მკგ |
| 10 × DNase I ბუფერი | 1მკლ |
| DNase I, RNase თავისუფალი (5 U/μL) | 1 U თითო μg RNA① |
| ddH2O | 10 მლ-მდე |
შენიშვნა: ① გამოთვალეთ DNase I-ის მოცულობა, რომელიც უნდა დაემატოს რნმ-ის რაოდენობის მიხედვით.
2. 37 ℃ 15 წუთის განმავლობაში;
3. დაამატეთ 0.5M EDTA საბოლოო კონცენტრაციას 2.5mM~5mM და გაათბეთ 65℃ 10 წუთის განმავლობაში, რათა შეაჩეროთ რეაქცია.ნიმუში შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ შემდეგი რეაქციისთვის, როგორიცაა საპირისპირო ტრანსკრიფციაექსპერიმენტი.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც მთლიანად დაშლის 1 მკგ pBR322-ს.დნმ 10 წუთში 37 გრადუსზე.
Ხარისხის კონტროლი
RNase:5 U DNase I 1.6 μg MS2 RNA 4 საათის განმავლობაში 37℃ ტემპერატურაზე არ იძლევა დეგრადაციას, რადგანგანისაზღვრება აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.
შენიშვნები
1. გთხოვთ, თავად მოამზადოთ 0.5MEDTA.
2. გამოიყენეთ 1U DNase I რნმ-ის მკგ-ზე.თუმცა, თუ რნმ 1მკგ-ზე ნაკლებია, გთხოვთ, გამოიყენოთ 1U DNase I.
3. გთხოვთ მოათავსოთ ფერმენტი ყინულზე ოპერაციის დროს.
