Bst 2.0 დნმ პოლიმერაზა (გლიცეროლის გარეშე)
Bst დნმ პოლიმერაზა V2 მიღებულია Bacillus stearothermophilus დნმ პოლიმერაზა I-დან, რომელსაც აქვს 5'→3' დნმ პოლიმერაზას აქტივობა და ძლიერი ჯაჭვის შემცვლელი აქტივობა, მაგრამ არა 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა.Bst დნმ პოლიმერაზა V2 იდეალურად შესაფერისია ჯაჭვის გადაადგილებისთვის, იზოთერმული გაძლიერებისთვის LAMP (Loop შუამავლობით იზოთერმული გაძლიერება) და სწრაფი თანმიმდევრობისთვის.
კომპონენტები
| Კომპონენტი | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA პოლიმერაზა V2 (გლიცეროლის გარეშე) (8 U/μL) | 0,2 მლ | 1 მლ | 10 მლ |
| 10×HC Bst V2 ბუფერი | 1,5 მლ | 2×1,5 მლ | 3×10 მლ |
| MgSO4(100 მმ) | 1,5 მლ | 2×1,5 მლ | 2×10 მლ |
აპლიკაციები
1.LAMP იზოთერმული გაძლიერება
2.დნმ-ის ჯაჭვის ერთჯერადი გადაადგილების რეაქცია
3.მაღალი GC გენის თანმიმდევრობა
4.ნანოგრამის დონის დნმ-ის თანმიმდევრობა.
შენახვის მდგომარეობა
ტრანსპორტირება 0°C-ზე და ინახება -25°C~-15°C ტემპერატურაზე.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც აერთიანებს 25 ნმოლ dNTP-ს მჟავაში უხსნად მასალაში 30 წუთში 65°C ტემპერატურაზე.
Ხარისხის კონტროლი
1.პროტეინის სისუფთავის ანალიზი (SDS-PAGE):Bst დნმ პოლიმერაზა V2-ის სისუფთავე არის ≥99% განსაზღვრული SDS-PAGE ანალიზით Coomassie Blue დეტექტირების გამოყენებით.
2.ეგზონუკლეაზას აქტივობა:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2-ს 1 μg λ-Hind Ⅲ დაიჯესტის დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37 ℃ ტემპერატურაზე, არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
3.Nickase Activity:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2 1 მკგ pBR322 დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე, არ იწვევს გამოვლენილ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
4.RNase აქტივობა:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2-ს 1.6 μg MS2 რნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე, არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.
5.E. coli დნმ:120 U Bst დნმ პოლიმერაზა V2 სკრინინგდება E. coli გენომიური დნმ-ის არსებობისთვის TaqMan qPCR გამოყენებით E. coli 16S rRNA ლოკუსისთვის სპეციფიკური პრაიმერებით.E. coli გენომიური დნმ-ის დაბინძურება არის ≤1 ასლი.
ნათურის რეაქცია
| კომპონენტები | 25μL |
| 10×HC Bst V2 ბუფერი | 2,5 მლ |
| MgSO4 (100 მმ) | 1.5 მლ |
| dNTP (თითოეული 10 მმ) | 3,5 მლ |
| SYTO™ 16 მწვანე (25×)a | 1.0 მლ |
| პრაიმერის ნაზავიb | 6 მლ |
| Bst დნმ პოლიმერაზა V2 (გლიცეროლის გარეშე) (8 ე/მლ) | 1 მლ |
| შაბლონი | × μL |
| ddH2O | 25 მლ-მდე |
შენიშვნები:
1) ა.SYTOTM 16 Green (25×): ექსპერიმენტული საჭიროებების მიხედვით, სხვა საღებავების გამოყენება შესაძლებელია შემცვლელად;
2) ბ.პრაიმერის ნაზავი: მიღებული 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μ M F3, 2.5 μ M B3, 5 μ M LF, 5 μ M LB და სხვა მოცულობების შერევით.
რეაქცია და მდგომარეობა
1 × HC Bst V2 ბუფერი, ინკუბაციური ტემპერატურაა 60°C-დან 65°C-მდე.
სითბოს ინაქტივაცია
80 °C, 20 წუთი
