BspQI
BspQI შეიძლება რეკომბინანტულად გამოხატული იყოს E. coli-ში, რომელსაც შეუძლია ამოიცნოს კონკრეტული ადგილები და წარმოიქმნება ქვეშ
BspQI, IIs შეზღუდვის ენდონუკლეაზას შეზღუდვის ენდონუკლეაზა, მიღებულია რეკომბინანტული E. coli შტამიდან, რომელიც ატარებს კლონირებულ და მოდიფიცირებულ BspQI გენს Bacillus sphaericus-ისგან.მას შეუძლია ამოიცნოს კონკრეტული ადგილები, ხოლო ამოცნობის თანმიმდევრობა და გაყოფის ადგილები შემდეგია:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
პროდუქტის მახასიათებლები
1. მაღალი აქტივობა, სწრაფი მონელება;
2. დაბალი ვარსკვლავის აქტივობა, რაც უზრუნველყოფს ზუსტი ჭრის „სკალპელის“ მსგავსად;
3. BSA-ს და ცხოველური წარმოშობის გარეშე;
მეთილაციის მგრძნობელობა
Dვარ მეთილაცია:არა მგრძნობიარე;
Dსმ მეთილაცია:არა მგრძნობიარე;
CpG მეთილაცია:არა მგრძნობიარე;
შენახვის პირობები
პროდუქტი უნდა გაიგზავნოს ≤ 0℃;ინახება -25~-15℃ მდგომარეობაში.
შენახვის ბუფერი
20 mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 μg/ml რეკომბინანტული ალბუმინი, 0. 1% Trition X-100 და 50% გლიცეროლი (pH 7.0 @ 25°C).
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 1 მკგ შიდა კონტროლის დნმ-ის მოსანელებლად 1 საათში 50°C ტემპერატურაზე 50 μL რეაქციის მთლიან მოცულობაში.
Ხარისხის კონტროლი
პროტეინის სისუფთავის ანალიზი (SDS-PAGE):BspQI-ის სისუფთავე იყო ≥95% განსაზღვრული SDS-PAGE ანალიზით.
RNase:10 U BspQI 1.6 μg MS2 RNA 4 საათის განმავლობაში 50℃ ტემპერატურაზე არ იძლევა დეგრადაციას, როგორც ეს განისაზღვრება აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.
არასპეციფიკური DNase აქტივობა:10 U BspQI 1μg λ დნმ-ით 50℃ 16 საათის განმავლობაში, შედარებით 50℃ 1 საათის განმავლობაში, არ იძლევა ზედმეტი დნმ-ს, როგორც ეს განისაზღვრება აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.
ლიგირება და მოჭრა:1 μg λDNA 10U BspQI-ით მონელების შემდეგ, დნმ-ის ფრაგმენტები შეიძლება ლიგატირდეს T4 დნმ ლიგაზასთან 16ºC-ზე.და ეს ლიგირებული ფრაგმენტები შეიძლება გადაიჭრას BspQI-ით.
E. coli დნმ: E. coli 16s rDNA-სპეციფიკური TaqMan qPCR გამოვლენამ აჩვენა, რომ E.coli გენომის ნარჩენი ≤ 0.1 pg/ul.
მასპინძელი ცილის ნარჩენი:≤ 50 ppm
ბაქტერიული ენდოტოქსინი: LAL-ტესტი, ჩინური ფარმაკოპეის IV 2020 გამოცემის მიხედვით, გელის ლიმიტის ტესტის მეთოდი, ზოგადი წესი (1143).ბაქტერიული ენდოტოქსინის შემცველობა უნდა იყოს ≤10 EU/mg.
რეაქციის სისტემა და პირობები
| Კომპონენტი | მოცულობა |
| BspQ I (10 ე/მკლ) | 1 მლ |
| დნმ | 1 მკგ |
| 10 x BspQ I ბუფერი | 5 მლ |
| dd H2O | 50 მლ-მდე |
რეაქციის პირობები: 50℃, 1-16 სთ.
სითბოს ინაქტივაცია: 80°C 20 წუთის განმავლობაში.
რეკომენდებულ რეაქციის სისტემას და პირობებს შეუძლია უზრუნველყოს შედარებით კარგი ფერმენტის მონელების ეფექტი, რაც მხოლოდ საცნობაროა, გთხოვთ, დეტალებისთვის მიმართოთ ექსპერიმენტულ შედეგებს.
პროდუქტის განაცხადი
შეზღუდვის ენდონუკლეაზას მონელება, სწრაფი კლონირება.
შენიშვნები
1. ფერმენტის მოცულობა ≤ რეაქციის მოცულობის 1/10.
2. ვარსკვლავის აქტივობა შეიძლება მოხდეს მაშინ, როდესაც გლიცერინის კონცენტრაცია 5%-ზე მეტია.
3. დაშლის აქტივობა შეიძლება მოხდეს, როდესაც სუბსტრატი რეკომენდებულ თანაფარდობაზე დაბალია.
