ულტრა ნუკლეაზა
UltraNuclease არის გენეტიკურად ინჟინერიული ენდონუკლეეზი, მიღებული Serratia marcescens, რომელსაც შეუძლია დნმ-ის ან რნმ-ის დაშლა, ორმაგი ან ერთჯაჭვიანი, ხაზოვანი ან წრიული პირობების ფართო დიაპაზონში, ნუკლეინის მჟავების სრულად დაშლა 5'-მონოფოსფატულ ოლიგონუკლეოტიდებად. .გენეტიკური ინჟინერიის მოდიფიკაციის შემდეგ, პროდუქტის ფერმენტაცია, ექსპრესია და გაწმენდა მოხდა Escherichia coli-ში (E. coli), რაც ამცირებს უჯრედის ზენატანისა და უჯრედის ლიზატის სამეცნიერო კვლევების სიბლანტეს, მაგრამ ასევე აუმჯობესებს პროტეინის გაწმენდის ეფექტურობას და ფუნქციურ კვლევას.ის ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას გენურ თერაპიაში, ვირუსის გაწმენდაში, ვაქცინის წარმოებაში, პროტეინისა და პოლისაქარიდის ფარმაცევტულ ინდუსტრიაში, როგორც მასპინძლის ნარჩენების ნუკლეინის მჟავას მოცილების რეაგენტი.
Პროდუქტის მახასიათებლები
| CAS No. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Მოლეკულური წონა | 30 kDa |
| იზოელექტრული წერტილი | 6.85 |
| ცილის სისუფთავე | ≥99% (SDS-PAGE და SEC-HPLC) |
| კონკრეტული აქტივობა | ≥1.1×106 ე/მგ |
| ოპტიმალური ტემპერატურა | 37°C |
| ოპტიმალური pH | 8.0 |
| პროტეაზის აქტივობა | უარყოფითი |
| ბიომძიმე | ＜10CFU/100000U |
| ნარჩენი მასპინძელი უჯრედის პროტეინი | ≤10ppm |
| Მძიმე მეტალი | ≤10ppm |
| ბაქტერიული ენდოტოქსინი | ＜0.25EU/1000U |
| შენახვის ბუფერი | 20 მმ ტრის-HCl, pH 8.0, 2 მმ MgCl2, 20 მმ NaCl, 50% გლიცეროლი |
შენახვის პირობები
≤0°C ტრანსპორტირება;-25~-15°C შენახვა, 2 წლიანი მოქმედების ვადა (აარიდეთ გაყინვა-დათბობა).
ერთეულის განმარტება
ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც გამოიყენება △A260-ის შთანთქმის მნიშვნელობის შესაცვლელად 1.0-ით 30 წუთის განმავლობაში 37 °C ტემპერატურაზე, pH 8.0, რომელიც ექვივალენტურია 37 მკგ ორაგულის სპერმის დნმ-ის ოლიგონუკლეოტიდებში დაჭრით, განისაზღვრა, როგორც აქტიური ერთეული (U).
Ხარისხის კონტროლი
ნარჩენი მასპინძელი უჯრედის პროტეინი: ELISA ნაკრები
•პროტეაზა ნარჩენები: 250 KU/მლ UltraNuclease რეაგირებდა სუბსტრატთან 60 წუთის განმავლობაში, არ იყო გამოვლენილი აქტივობა.
•ბაქტერიული ენდოტოქსინი: LAL-ტესტი, ჩინეთის სახალხო რესპუბლიკის ფარმაკოპეა ტომი 4 (2020 გამოცემა) გელის ლიმიტის ტესტის მეთოდი.ზოგადი წესები (1143).
•ბიოლოგიური ტვირთი: ჩინეთის სახალხო რესპუბლიკის ფარმაკოპეა ტომი 4 (2020 გამოცემა) — ზოგადი
სტერილობის ტესტის წესები (1101), PRC ეროვნული სტანდარტი, GB 4789.2-2016.
•Მძიმე მეტალი:ICP-AES, HJ776-2015.
Ოპერაცია
ულტრანუკლეაზას აქტივობა მნიშვნელოვნად იყო დათრგუნული, როდესაც SDS კონცენტრაცია იყო 0.1% ან EDTA-ზე მეტი
კონცენტრაცია იყო 1 მმ-ზე მეტი. სურფაქტანტი Triton X-100, Tween 20 და Tween 80 არ მოქმედებდა ნუკლეაზაზე
თვისებები, როდესაც კონცენტრაცია იყო 1,5%-ზე ნაკლები.
| Ოპერაცია | ოპტიმალური ოპერაცია | მოქმედი ოპერაცია |
| ტემპერატურა | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 მმ | 1-15 მმ |
| DTT | 0-100 მმ | > 100 მმ |
| 2-მერკაპტოეთანოლი | 0-100 მმ | > 100 მმ |
| მონოვალენტური ლითონის იონი (Na+, K+ და ა.შ.) | 0-20 მმ | 0-200 მმ |
| PO43- | 0-10 მმ | 0-100 მმ |
გამოყენება და დოზირება
• ამოიღეთ ეგზოგენური ნუკლეინის მჟავა ვაქცინის პროდუქტებიდან, შეამცირეთ ნარჩენი ნუკლეინის მჟავას ტოქსიკურობის რისკი და გააუმჯობესეთ პროდუქტის უსაფრთხოება.
• ნუკლეინის მჟავით გამოწვეული საკვების სითხის სიბლანტის შემცირება, დამუშავების დროის შემცირება და ცილის მოსავლიანობის გაზრდა.
• ამოიღეთ ნუკლეინის მჟავა, რომელშიც შეფუთულია ნაწილაკი (ვირუსი, ინკლუზიური სხეული და ა.შ.), რომელიც ხელს უწყობს
ნაწილაკების გათავისუფლებას და გაწმენდას.
| ექსპერიმენტული ტიპი | ცილის წარმოება | ვირუსი, ვაქცინა | უჯრედული პრეპარატები |
| უჯრედების ნომერი | 1გრ უჯრედის სველი წონა (ხელახლა შეჩერებულია 10 მლ ბუფერთან ერთად) | დუღილი 1ლ თხევადი სუპერნატანტი | 1ლ კულტურა |
| მინიმალური დოზა | 250 U | 100 U | 100 U |
| რეკომენდებული დოზა | 2500 U | 25000 U | 5000U |
• ნუკლეაზებით დამუშავებას შეუძლია გააუმჯობესოს ნიმუშის გარჩევადობა და აღდგენა სვეტის ქრომატოგრაფიისთვის, ელექტროფორეზისა და ბლოტის ანალიზისთვის.
• გენური თერაპიის დროს ნუკლეინის მჟავას აშორებენ გაწმენდილი ადენო-ასოცირებული ვირუსების მისაღებად.
