RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
ეს პროდუქტი შეიცავს რეაქციის ბუფერს, RT-ფერმენტების მიქსს (Bst დნმ პოლიმერაზა და სითბოს მდგრადი საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა), ლიოფილიზებულ დამცავ საშუალებებს და ქრომოგენურ საღებავ კომპონენტებს.გამოსაყენებლად გამოიყენეთ ბუფერი, რეაქციის ფერმენტი და პრაიმერი ურევენ და ემატება შაბლონს;ლიოფილიზებული დამცავი საშუალების დამატება შეიძლება იყოს სწორი.იგი დაუკავშირდა ლიოფილიზატორს და ლიოფილიზებული იყო და მხოლოდ პრაიმერები და შაბლონები დაემატა გამოყენებისას.ეს ნაკრები უზრუნველყოფს ამპლიფიკაციის სწრაფ, მკაფიო ვიზუალურ გამოვლენას, რომლის უარყოფითი რეაქცია აღინიშნება წითლად და დადებითი რეაქცია აღინიშნება ყვითელზე ცვლილებით.
Კომპონენტი
| Კომპონენტი | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| მარყუჟის შუამავლობით გამაძლიერებელი ბუფერი (საღებავებით) | 0,96 მლ | 4.80 მლ×2 | 9.60 მლ×10 |
| RT-ფერმენტების მიქსი | 270 მლ | 2,70 მლ | 2.70 მლ×10 |
| ლიოფილიზებული დამცავი საშუალება | 0.96 მლ×2 | 9.60 მლ×2 | 9.60 მლ×20 |
აპლიკაციები
დნმ-ის ან რნმ-ის იზოთერმული გაძლიერებისათვის.
შენახვის პირობები
ტრანსპორტირება მშრალი ყინულით, ინახება -25~ -15℃.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას, პროდუქტი მოქმედებს 12 თვის განმავლობაში.
Ოქმი
1.გაალღვეთ რეაქციის ბუფერი, რომელიც გამოიყენება ოთახის ტემპერატურაზე.მორევით მოკლედ ან რამდენჯერმე გადააბრუნეთ მილები, რომ კარგად შეურიოთ, შემდეგ მოათავსეთ ცენტრიფუგა სითხე მილის ძირამდე.
2.რეაქციის სისტემის მომზადება.ეს რეაგენტი შეიძლება მომზადდეს ორ რეაქციის სისტემაში, თხევადი რეაქციის ნაზად და ლიოფილიზებული სისტემის ნარევში.
1) მოამზადეთ თხევადი რეაქციის ნარევი
| Კომპონენტი | მოცულობა |
| მარყუჟის შუამავლობით გამაძლიერებელი ბუფერი (საღებავებით) | 10 მლ |
| RT-ფერმენტების მიქსი | 2.8 მლ |
| 10 × პრაიმერის მიქსიa | 5 მლ |
| დნმ/რნმ-ის შაბლონები b | × μL |
| ნუკლეაზის გარეშე წყალი | 50 მლ-მდე |
2) ლიოფილიზაციის სისტემის ნაზავი
① მოამზადეთ ლიოფილიზებული ნარევი
| Კომპონენტი | მოცულობა |
| მარყუჟის შუამავლობით გამაძლიერებელი ბუფერი (საღებავებით) | 10 მლ |
| ლიოფილიზებული დამცავი საშუალება | 20 მლ |
| RT-ფერმენტების მიქსი | 2.8 მლ |
| ნუკლეაზის გარეშე წყალი | 50 მლ-მდე |
② ლიოფილიზაცია: მომზადებული ნარევი ლიოფილიზებულია 50 μL სისტემაში
③ მოამზადეთ სარეაქციო ნაზავი
| Კომპონენტი | მოცულობა |
| ლიოფილიზებული ნაზავი | 1 ნაჭერი |
| 10 × პრაიმერის მიქსიa | 5 მლ |
| დნმ/რნმ-ის შაბლონები b | × μL |
| ნუკლეაზის გარეშე წყალი | 50 მლ-მდე |
შენიშვნები:
1) ა.10×პრაიმერის ნაზავი: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM მარყუჟი F/B;
2) ბ.DEPC (წყალში ხსნადი) რეკომენდირებულია ნუკლეინის მჟავას ტემპლისთვის.
1.ინკუბაცია 65°C-ზე 30-45 წუთის განმავლობაში, რომელიც შეიძლება გაგრძელდეს სათანადოდ ფერის ცვლილების რეაქციის დროის მიხედვით.
2.შეუიარაღებელი თვალით ყვითელი იყო დადებითი, წითელი კი უარყოფითი.
შენიშვნები
1.მარილი შეიძლება გამოჩნდეს ბუფერული მილის ძირში, მორევა მოკლედ ან შებრუნებული მილები რამდენჯერმე ოთახის ტემპერატურაზე საფუძვლიანად შერევისთვის.
2.რეაქციის ტემპერატურის ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 62 ℃-დან 68 ℃-მდე, პრაიმერების მდგომარეობის მიხედვით.
3.შეფუთული რეაგენტები არ უნდა იყოს ჰაერში დიდი ხნის განმავლობაში.
4.წითელი და ყვითელი ფერის შეფერილობის რეაქცია დამოკიდებულია რეაქციის სისტემის pH ცვლილებაზე, გთხოვთ არ გამოიყენოთ ტრის ნუკლეინის მჟავას შემცველი შესანახი ხსნარი, რეკომენდებულია ddH გამოყენება2O შენახული ნუკლეინის მჟავა;
5.ექსპერიმენტი უნდა იყოს სტანდარტიზებული, მათ შორის რეაქციის სისტემის მომზადება, ლიოფილიზაცია და ნიმუშის დამუშავება და ნიმუშის დამატების პროცესი;
6.დაბინძურების თავიდან აცილების მიზნით რეკომენდირებულია რეაქციის სისტემის მომზადება ულტრა სუფთა სკამზე, სხვა თარგების დამატება ოთახის გამწოვზე ცრუ დადებითი ჩარევის თავიდან ასაცილებლად.
