M-MLV საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა
RevScript საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა მიიღება გენეტიკური ინჟინერიის ტექნოლოგიით.მას აქვს cDNA სინთეზის უფრო მაღალი უნარი, თერმული სტაბილურობა და რეაქციის ტემპერატურის ზღვარი (60°C-მდე).სინთეზირებული cDNA პროდუქტი 10 კბ-მდეა.ის აძლიერებს შაბლონების აფინურობას და შესაფერისია რნმ-ის შაბლონების საპირისპირო ტრანსკრიფციისთვის, რთული მეორადი სტრუქტურით ან დაბალი ასლის გენით.
კომპონენტები
| Კომპონენტი | HC2003 ბ-01 (10,000 U) | HC2003 ბ-02 (5*10000U) | HC2003 ბ-03 (200,000 U) |
| RevScript უკუ ტრანსკრიპტაზა (200 U/μL) | 50 მლ | 5×50 მლ | 1 მლ |
| 5 × RevScript ბუფერი | 250 მლ | 1,25 მლ | 5 მლ |
შენახვის მდგომარეობა
ეს პროდუქტი უნდა ინახებოდეს -25°C~-15°C ტემპერატურაზე 2 წლის განმავლობაში.
ერთეულის განმარტება
ერთი ერთეული აერთიანებს 1 ნმოლ dTTP-ს მჟავაში უხსნად მასალაში 10 წუთში 37°C ტემპერატურაზე Oligo(dT) პრაიმერების გამოყენებით.
რეაქციის დაყენება
1. რნმ შაბლონის დენატურაცია (ეს ნაბიჯი არჩევითია, რნმ-ის შაბლონის დენატურაცია ხელს უწყობს მეორადი სტრუქტურების გახსნას, რაც გააუმჯობესებს პირველი ჯაჭვის cDNA-ს გამოსავალს.)
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) |
| RNase თავისუფალი ddH2O | 13-მდე |
| ოლიგო (dT)18 (50 მკმოლ/ლ) ან შემთხვევითი პრაიმერი (50 მკმოლ/ლ) ან გენის სპეციფიკური პრაიმერები (2 μmol/L) | 1 |
| ან 1 | |
| ან 1 | |
| რნმ შაბლონი | Xa |
შენიშვნები:
1) ა: საერთო რნმ: 1-5 ug ან mRNA: 1-500 ნგ
2) ინკუბაცია 65°C-ზე 5 წუთის განმავლობაში, შემდეგ გადაიტანეთ ყინულზე დაუყოვნებლივ გასაცივებლად 2 წუთის განმავლობაში.მოკლე ცენტრიფუგირება რეაქციის სითხის შესაგროვებლად, დაამატეთ საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაქციის ხსნარი, როგორც ნაჩვენებია შემდეგ ცხრილში.ნაზად დაასხით პიპეტი, რომ შეურიოთ.
1. სარეაქციო ნარევის მომზადება (20 μL მოცულობა)
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) |
| წინა ეტაპის ნაზავი | 13 |
| 5 × ბუფერი | 4 |
| dNTP Mix (10 ნმოლ/ლ) | 1 |
| საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა (200 ე/მკლ) | 1 |
| RNase ინჰიბიტორი (40 U/μL) | 1 |
1.შეასრულეთ რეაქცია შემდეგ პირობებში:
| ტემპერატურა (°C) | დრო |
| 25 °Ca | 5 წთ |
| 42 °Cb | 15-30 წუთი |
| 85 °Cc | 5 წთ |
შენიშვნები:
1) ა.ინკუბაცია 25°C-ზე 5 წუთის განმავლობაში საჭიროა მხოლოდ შემთხვევითი ჰექსამერების გამოყენებისთვის.გთხოვთ, გამოტოვოთ ეს ნაბიჯი ოლიგოს (dT) გამოყენებისას18ან გენის სპეციფიკური პრაიმერი.
2) ბ.რეკომენდირებული საპირისპირო ტრანსკრიფციის ტემპერატურაა 42°C, რთული მეორადი სტრუქტურის ან GC მაღალი შემცველობის მქონე შაბლონებისთვის რეკომენდებულია რეაქციის ტემპერატურის ამაღლება 50-55°C-მდე.
3) გ.გათბობა 85°C-ზე 5 წუთის განმავლობაში საპირისპირო ტრანსკრიპტაზის ინაქტივირებისთვის.
4) პროდუქტი შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ PCR ან qPCR რეაქციებში, ან ინახება -20°C-ზე მოკლევადიანი შენახვისთვის.გრძელვადიანი შენახვისთვის რეკომენდებულია პროდუქტების ალიგუტირება და შენახვა -80°C ტემპერატურაზე.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას.
5) პროდუქტი ვარგისია ერთსაფეხურიანი RT-qPCR-ისთვის, რეკომენდებულია 10-20 U უკუ ტრანსკრიპტაზას დამატება ყოველ 25 μL რეაქციის სისტემაზე, ან თანდათან გაზარდოს უკუ ტრანსკრიპტაზას რაოდენობა რეალური სიტუაციის მიხედვით.
შენიშვნები
1.გთხოვთ, შეინარჩუნოთ საცდელი ტერიტორია სუფთად;ოპერაციის დროს უნდა ატაროთ სუფთა ხელთათმანები და ნიღბები.ექსპერიმენტში გამოყენებული ყველა სახარჯო მასალა უნდა იყოს RNase თავისუფალი, რათა თავიდან აიცილოს RNase დაბინძურება.
2. ყველა პროცედურა უნდა ჩატარდეს ყინულზე რნმ-ის დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად.
3. მაღალი ხარისხის რნმ-ის ნიმუშები რეკომენდებულია საპირისპირო ტრანსკრიპციის მაღალი ეფექტურობის უზრუნველსაყოფად.
4. ეს პროდუქტი განკუთვნილია მხოლოდ კვლევისთვის.
5. გთხოვთ იმოქმედოთ ლაბორატორიული ხალათებით და ერთჯერადი ხელთათმანებით, თქვენი უსაფრთხოებისთვის.
