თბილი დაწყება Bst 2.0 დნმ პოლიმერაზა (გლიცეროლის გარეშე)

Bst დნმ პოლიმერაზა V2 მიღებულია Bacillus stearothermophilus დნმ პოლიმერაზა I-დან, რომელსაც აქვს 5'→3' დნმ პოლიმერაზას აქტივობა და ძლიერი ჯაჭვის შემცვლელი აქტივობა, მაგრამ არა 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა.Bst დნმ პოლიმერაზა V2 იდეალურად შესაფერისია ჯაჭვის გადაადგილებისთვის, იზოთერმული გაძლიერებისთვის LAMP (Loop შუამავლობით იზოთერმული გაძლიერება) და სწრაფი თანმიმდევრობისთვის.Bst დნმ პოლიმერაზა V2 არის ცხელი დაწყების ვერსია, რომელიც დაფუძნებულია Bst დნმ პოლიმერაზა V2-ზე (HC5005A), მიღებული შექცევადი მოდიფიკაციის ტექნოლოგიით, რომელსაც შეუძლია დათრგუნოს დნმ პოლიმერაზას აქტივობა ოთახის ტემპერატურაზე, ასე რომ, რეაქციის სისტემის მუშაობა და ფორმულირება შესაძლებელია ოთახის ტემპერატურაზე, რათა თავიდან იქნას აცილებული არა -სპეციფიკური გაძლიერება და რეაქციის ეფექტურობის გაუმჯობესება და ამ ვერსიის ლიოფილიზება შესაძლებელია.გარდა ამისა, მისი აქტივობა გამოიყოფა მაღალ ტემპერატურაზე, ამიტომ არ არის საჭირო ცალკე გააქტიურების ნაბიჯი.

კომპონენტები

Bst დნმ პოლიმერაზა V2 (გლიცეროლის გარეშე) (8U/μL)

აპლიკაციები

1.LAMP იზოთერმული გაძლიერება

2.დნმ-ის ჯაჭვის ერთჯერადი გადაადგილების რეაქცია

3.მაღალი GC გენის თანმიმდევრობა

4.ნანოგრამის დონის დნმ-ის თანმიმდევრობა.

შენახვის მდგომარეობა

ტრანსპორტირება 0°C-ზე და ინახება -25°C~-15°C ტემპერატურაზე.

ერთეულის განმარტება

ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც აერთიანებს 25 ნმოლ dNTP-ს მჟავაში უხსნად მასალაში 30 წუთში 65°C ტემპერატურაზე.

Ხარისხის კონტროლი

1.პროტეინის სისუფთავის ანალიზი (SDS-PAGE):Bst დნმ პოლიმერაზა V2-ის სისუფთავე არის ≥99% განსაზღვრული SDS-PAGE ანალიზით Coomassie Blue დეტექტირების გამოყენებით.

2.Eენდონუკლეაზააქტივობა:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2-ს 1 μg λDNA-სთან ერთად 16 საათის განმავლობაში 37 ℃ ტემპერატურაზე, არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.

3.ეგზონუკლეაზას აქტივობა:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2-ს 1 μg λ-Hind Ⅲ დაიჯესტის დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37 ℃ ტემპერატურაზე, არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.

4.Nickase Activity:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2 1 მკგ pBR322 დნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე, არ იწვევს გამოვლენილ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.

5.RNase აქტივობა:50 μL რეაქციის ინკუბაცია, რომელიც შეიცავს მინიმუმ 8 U Bst დნმ პოლიმერაზას V2-ს 1.6 μg MS2 რნმ-ით 16 საათის განმავლობაში 37°C-ზე, არ იწვევს შესამჩნევ დეგრადაციას, როგორც დადგენილია.

6.E. coliდნმ:120 U Bst დნმ პოლიმერაზა V2 სკრინინგდება E. coli გენომიური დნმ-ის არსებობისთვის TaqMan qPCR გამოყენებით E. coli 16S rRNA ლოკუსისთვის სპეციფიკური პრაიმერებით.E. coli გენომიური დნმ-ის დაბინძურება არის ≤1 ასლი.

ნათურის რეაქცია

შენიშვნები:

1) ა.SYTOTM 16 Green (25×): ექსპერიმენტული საჭიროებების მიხედვით, სხვა საღებავების გამოყენება შესაძლებელია შემცვლელად;

2) ბ.პრაიმერის ნაზავი: მიღებული 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μ M F3, 2.5 μ M B3, 5 μ M LF, 5 μ M LB და სხვა მოცულობების შერევით.

რეაქცია და მდგომარეობა

1 × HC Bst V2 ბუფერი, ინკუბაციური ტემპერატურაა 60°C-დან 65°C-მდე.

სითბოს ინაქტივაცია

 80°C, 20 წთ