ტემპერატურის მგრძნობიარე UNG
ტემპერატურის მგრძნობიარე UNG (TS-UNG) არის E. coli-ში რეკომბინანტული ექსპრესიით მიღებული.ფერმენტი კატალიზებს თავისუფალი ურაცილის გამოყოფას ურაცილის შემცველი ერთ და ორჯაჭვიანი დნმ-დან და არააქტიურია რნმ-ის მიმართ.E. coli გენის წარმოშობის ჩვეულებრივ UNG ფერმენტთან შედარებით, TS-UNG ფერმენტს აქვს უფრო მაღალი აქტივობა დაბალ ტემპერატურაზე (20℃~37℃) და არის ტემპერატურის მგრძნობიარე და ადვილად ინაქტივირებული (50℃), თავიდან აიცილებს dUTP-ის შემცველი გაძლიერების დეგრადაციას. პროდუქტები ოთახის ტემპერატურაზე ნარჩენი აქტივობით, რომელიც შეიძლება დარჩეს ჩვეულებრივი UNG ფერმენტის ინაქტივაციის შემდეგ.ამიტომ, TS-UNG ფერმენტი არა მხოლოდ შესაფერისია PCR დაბინძურების პრევენციის რეაქციისთვის, არამედ კარგად ემთხვევა RT-PCR გაძლიერების პროგრამას და შეიძლება გამოყენებულ იქნას RT-PCR დაბინძურების პრევენციის რეაქციაში.
რეკომენდებული აპლიკაცია
დაბინძურების პრევენციის გაძლიერება
შენახვის მდგომარეობა
-20°C ხანგრძლივი შენახვისთვის, გამოყენებამდე კარგად უნდა იყოს შერეული, მოერიდეთ ხშირი გაყინვა-დათბობას.
შენახვის ბუფერი
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, სტაბილიზატორი, 50% გლიცეროლი.
ერთეულის განმარტება
ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 1 მკგ დU ფუძეების შემცველი ერთჯაჭვიანი დნმ-ის დასაშლელად 1 საათში 37°C ტემპერატურაზე არის აქტივობის 1 ერთეული (U).
Ხარისხის კონტროლი
1.SDS-PAGE ელექტროფორეზული სისუფთავე 98%-ზე მეტი
2.დეგრადაციის აქტივობა, პარტია-სერიული კონტროლი, სტაბილურობა
3.არ არის ეგზოგენური ნუკლეაზას აქტივობა, არ არის ეგზოგენური ენდონუკლეაზა ან ეგზონუკლეაზა დაბინძურება.
ინსტრუქციები
| კომპონენტები | მოცულობა (μL) | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 10 × PCR ბუფერი (dNTP თავისუფალი, Mg²+უფასო) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 მკმ |
| dUTP (ჩანაცვლება dTTP) | - | 200-600 მკმ |
| 25 მმ MgCl2 | 2-8 მლ | 1-4 მმ |
| 5 ე/მკლ ტაკ | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × პრაიმერის მიქსია | 2 | 1× |
| შაბლონი | - | ＜1მკგ/რეაქცია |
| ddH2O | 50-მდე | - |
შენიშვნა: a: თუ გამოიყენება qPCR/qRT-PCR-სთვის, ფლუორესცენტური ზონდი უნდა დაემატოს რეაქციის სისტემას.ჩვეულებრივ, პრაიმერის საბოლოო კონცენტრაცია 0.2 μM-ს შეუძლია კარგი შედეგის მოცემა;როდესაც რეაქცია ცუდია, პრაიმერის კონცენტრაცია შეიძლება დარეგულირდეს 0,2-1 μM დიაპაზონში.ჩვეულებრივ, ზონდის კონცენტრაცია ოპტიმიზებულია 0.1-0.3 μM დიაპაზონში.კონცენტრაციის გრადიენტის ექსპერიმენტები შეიძლება ჩატარდეს პრაიმერისა და ზონდის საუკეთესო კომბინაციის მოსაძებნად.
შენიშვნები
1.TS-UNG ფერმენტის რეაქციის ოპტიმალური ტემპერატურა შედარებით დაბალია და მისი ოპტიმიზაცია შესაძლებელია 20℃~37℃ დიაპაზონში, ფერმენტის დოზა და რეაქციის დრო შეიძლება ოპტიმიზირებული იყოს 0.1-0.5 U, 5~ დიაპაზონში. 10 წთ;და ფერმენტი შეიძლება ინაქტივირებული იყოს საპირისპირო ტრანსკრიფციის პროცესში.
2.შესაფერისია PCR და RT-PCR-სთვის დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად.
3.მოერიდეთ ხშირ გაყინვა-დათბობას და არ ექვემდებარებოდეთ ტემპერატურის დიდ რყევებს.
4.გასაძლიერებელ სხვადასხვა გენს აქვს dUTP-ის გამოყენების განსხვავებული ეფექტურობა და UNG ფერმენტის მიმართ მგრძნობელობა, ამიტომ, თუ UNG სისტემის გამოყენება იწვევს გამოვლენის მგრძნობელობის შემცირებას, რეაქციის სისტემა უნდა დარეგულირდეს და ოპტიმიზირებული იყოს. თუ გჭირდებათ ტექნიკური მხარდაჭერა, გთხოვთ დაუკავშირდეთ ჩვენი კომპანია.
