DNase I

დნაზა I (დეოქსირიბონუკლეაზა I) არის ენდოდეოქსირიბონუკლეაზა, რომელსაც შეუძლია ერთჯაჭვიანი ან ორჯაჭვიანი დნმ-ის მონელება.ის ცნობს და წყვეტს ფოსფოდიესტერულ ობლიგაციებს, რათა წარმოქმნას მონოდეოქსინუკლეოტიდები ან ერთჯერადი ან ორჯაჭვიანი ოლიგოდეოქსინუკლეოტიდები ფოსფატური ჯგუფებით 5'-ტერმინალზე და ჰიდროქსილით 3'-ტერმინალზე.DNase I-ის აქტივობა დამოკიდებულია Ca2+-ზე და შეიძლება გააქტიურდეს ორვალენტიანი ლითონის იონებით, როგორიცაა Mn2+ და Zn2+.5 მმ Ca2+ იცავს ფერმენტს ჰიდროლიზისგან.Mg2+-ის თანდასწრებით, ფერმენტს შეუძლია შემთხვევით ამოიცნოს და გაჭრას ნებისმიერი ადგილი დნმ-ის ნებისმიერ ჯაჭვზე.Mn2+-ის თანდასწრებით, დნმ-ის ორმაგი ჯაჭვები შეიძლება ერთდროულად ამოიცნონ და გაიჭრას თითქმის ერთსა და იმავე ადგილას, რათა წარმოიქმნას ბრტყელი ბოლოების დნმ-ის ფრაგმენტები ან წებოვანი ბოლო დნმ-ის ფრაგმენტები 1-2 ნუკლეოტიდით ამობურცული.

პროდუქტის საკუთრება

მსხვილფეხა რქოსანი პანკრეასის დნაზა I გამოხატული იყო საფუარის ექსპრესიის სისტემაში და გაწმენდილი იყო.

Cკომპონენტები

ტრანსპორტირება და შენახვა

1. შენახვის სტაბილურობა: – 15℃~-25℃ შესანახად;

2.ტრანსპორტის სტაბილურობა: ტრანსპორტირება ყინულის პაკეტების ქვეშ;

3. მიწოდებული: 10 მმ Tris-HCl, 2 mM CaCl₂, 50% გლიცერინი, pH 7.6 25℃.

ერთეულის განმარტება

ერთი ერთეული განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც მთლიანად დაშლის 1 მკგ pBR322 დნმ-ს 10 წუთში 37°C ტემპერატურაზე.

Ხარისხის კონტროლი

RNase:5 U DNase I 1,6 μg MS2 RNA 4 საათის განმავლობაში 37 ℃ არ იძლევა დეგრადაციას, როგორც ეს განისაზღვრება აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.

ბაქტერიული ენდოტოქსინი:LAL-ტესტი, ჩინური ფარმაკოპეის IV 2020 გამოცემის მიხედვით, გელის ლიმიტის ტესტის მეთოდი, ზოგადი წესი (1143).ბაქტერიული ენდოტოქსინის შემცველობა უნდა იყოს ≤10 EU/mg.

Ინსტრუქცია გამოსაყენებლად

1. მოამზადეთ რეაქციის ხსნარი RNase-გან თავისუფალ მილში ქვემოთ ჩამოთვლილი პროპორციების მიხედვით:

2.37 ℃ 15 წუთის განმავლობაში;

3. დაამატეთ შეწყვეტის ბუფერი რეაქციის შესაჩერებლად და გაათბეთ 65℃ 10 წუთის განმავლობაში DNase I-ის ინაქტივირებისთვის. ნიმუში შეიძლება პირდაპირ იქნას გამოყენებული ტრანსკრიფციის შემდეგი ექსპერიმენტისთვის.

შენიშვნები

1. გამოიყენეთ 1U DNase I რნმ-ის მკგ-ზე, ან 1U DNase I რნმ-ის 1მკგ-ზე ნაკლებისთვის.

2. EDTA უნდა დაემატოს საბოლოო კონცენტრაციას 5 მმ, რათა დაიცვას რნმ ფერმენტის ინაქტივაციის დროს დეგრადაციისგან.