CHO HCP ELISA ნაკრები
ამ ანალიზში გამოიყენება ერთსაფეხურიანი იმუნოსორბენტული ELISA მეთოდი.ნიმუშები, რომლებიც შეიცავს CHOK1 HCP, ერთდროულად რეაგირებენ HRP-ით ეტიკეტირებულ თხის ანტი-CHOK1 ანტისხეულთან და ანტი-CHOK1 ანტისხეულთან, რომელიც დაფარულია ELISA ფირფიტაზე, საბოლოოდ წარმოქმნის მყარი ფაზის ანტისხეულების-HCP-ის ეტიკეტირებული ანტისხეულების სენდვიჩ კომპლექსს.შეუკავშირებელი ანტიგენ-ანტისხეული შეიძლება მოიხსნას ELISA ფირფიტის გარეცხვით.TMB სუბსტრატს ემატება ჭაბურღილი საკმარისი რეაქციისთვის.შეჩერების ხსნარის დამატების შემდეგ ფერის განვითარება ჩერდება და რეაქციის ხსნარის OD ან შთანთქმის მნიშვნელობა 450/650 ნმ-ზე იკითხება მიკროპლატის წამკითხველით.OD მნიშვნელობა ან შთანთქმის მნიშვნელობა ხსნარში HCP შემცველობის პროპორციულია.აქედან, HCP კონცენტრაცია ხსნარში შეიძლება გამოითვალოს სტანდარტული მრუდის მიხედვით.
განაცხადი
ეს ნაკრები გამოიყენება ნიმუშებში CHOK1 მასპინძელი უჯრედის ცილის ნარჩენების შემცველობის რაოდენობრივად გამოსავლენად.
Cკომპონენტები
| S/N | Კომპონენტი | კონცენტრაცია | შენახვის პირობები |
| 1 | CHOK1 HCP სტანდარტი | 0.5 მგ/მლ | ≤–20℃ |
| 2 | ანტი-CHO HCP-HRP | 0.5 მგ/მლ | ≤–20℃, დაიცავით სინათლისგან |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, დაიცავით სინათლისგან |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | ხსნარის გაჩერება | NA | RT |
| 6 | მიკროფირფიტის დალუქვები | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | მაღალი ადსორბციის წინასწარი საფარი ფირფიტები | NA | 2-8℃ |
საჭირო აღჭურვილობა
| სახარჯო მასალები / აღჭურვილობა | წარმოება | კატალოგი |
| მიკროფირფიტის მკითხველი | მოლეკულური მოწყობილობები | Spectra Max M5, M5e ან ექვივალენტი |
| თერმომიქსერი | ეპენდორფი | Eppendorf/5355, ან ექვივალენტი |
| ვორტექსის მიქსერი | იკა | MS3 ციფრული, ან ექვივალენტი |
შენახვა და სტაბილურობა
1.ტრანსპორტირება -25~-15°C ტემპერატურაზე.
2.შენახვის პირობები მოცემულია ცხრილში 1;კომპონენტები 1-2 ინახება ≤–20°C,5-6 ინახება RT,3,4, 7, 8 ინახება 2-8℃ ტემპერატურაზე;მოქმედების ვადაა 12 თვე.
პროდუქტის პარამეტრები
1.მგრძნობელობა: 1ნგ/მლ
2.გამოვლენის დიაპაზონი:3-100ნგ/მლ
3.სიზუსტე: ინტრა-ანალიზის CV≤ 10%, ანალიზთაშორის CV≤ 15%
4.HCP დაფარვა: >80%
5.სპეციფიკა: ეს ნაკრები უნივერსალურია, რადგან ის კონკრეტულად რეაგირებს CHOK1 HCP-თან დამოუკიდებლად გაწმენდის პროცესისგან.
რეაგენტის მომზადება
1.PBST 0.05%
მიიღეთ 15 მლ 20×PBST 0.05%, განზავებული ddH-ში2O, და დამზადებულია 300 მლ-მდე.
2.1.0% BSA
აიღეთ 1გ BSA ბოთლიდან და განზავეთ 100 მლ PBST 0.05%, კარგად აურიეთ სანამ მთლიანად არ დაიშლება და შეინახეთ 2-8°C ტემპერატურაზე.მომზადებული განზავების ბუფერი მოქმედებს 7 დღის განმავლობაში.რეკომენდებულია საჭიროებისამებრ მომზადება.
3.გამოვლენის ხსნარი 2მკგ/მლ
მიიღეთ 48 მკლ 0.5 მგ/მლ Anti-CHO HCP-HRP და განზავდეს 11,952 მკლ 1% BSA-ში, რათა მიიღოთ 2 მკგ/მლ დეტექტორული ხსნარის საბოლოო კონცენტრაცია.
4.QC და CHOK1 HCP სტანდარტების მომზადება
| მილი არა. | Ორიგინალური | კონცენტრაცია | მოცულობა | 1% BSA | მთლიანი მოცულობა | საბოლოო |
| A | სტანდარტული | 0.5 მგ/მლ | 10 | 490 | 500 | 10000 |
| B | A | 10000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ცხრილი: QC და სტანდარტების მომზადება
ანალიზის პროცედურა
1.მოამზადეთ რეაგენტები, როგორც ეს მითითებულია „რეაგენტის მომზადებაში“ ზემოთ.
2.აიღეთ 50 μL სტანდარტები, ნიმუშები და QCs (იხილეთ ცხრილი 3) თითოეულ ჭაბურღილში, შემდეგ დაამატეთ 100 μL Detection ხსნარი (2 μg/mL);დააფარეთ თეფშს სილეერი და მოათავსეთ ELISA ფირფიტა თერმომიქსერზე.ინკუბაცია 500 rpm-ზე, 25±3℃ 2 საათის განმავლობაში.
3.გადააბრუნეთ მიკროფილა ნიჟარაში და გადააგდეთ საფარის ხსნარი.პიპეტით 300 μL PBST 0.05% თითოეულ ჭაბურღილში ELISA ფირფიტის გასარეცხად და ხსნარის გადაყრისთვის და გაიმეორეთ რეცხვა 3-ჯერ.გადააბრუნეთ ფირფიტა სუფთა ქაღალდის პირსახოცზე და გააშრეთ.
4.დაამატეთ 100 μL TMB სუბსტრატი (იხ. ცხრილი 1) თითოეულ ჭაბურღილს, დახურეთ ELISA ფირფიტა და ინკუბაცია სიბნელეში 25±3℃ 15 წუთის განმავლობაში.
5.ჩაასხით 100 μL გაჩერების ხსნარი თითოეულ ჭაბურღილში.
6.გაზომეთ შთანთქმა ტალღის სიგრძეზე 450/650 ნმ მიკროპლატის წამკითხველით.
7.გაანალიზეთ მონაცემები SoftMax-ის ან ექვივალენტური პროგრამული უზრუნველყოფის საშუალებით.დახაზეთ სტანდარტული მრუდი ოთხი პარამეტრიანი ლოგისტიკური რეგრესიის მოდელის გამოყენებით.
სტანდარტული მრუდის მაგალითი
შენიშვნა: თუ HCP-ის კონცენტრაცია ნიმუშში აღემატება სტანდარტული მრუდის ზედა ზღვარს, ტესტირებამდე ის სათანადოდ უნდა განზავდეს განზავების ბუფერით.
შენიშვნები
გაჩერების ხსნარი არის 2M გოგირდის მჟავა, გთხოვთ, ფრთხილად მოეპყროთ, რათა თავიდან აიცილოთ დაფეთება!
